货号：UPLC-MS-4063
规格：100T/48S
微量法
货号：UPLC-MS-4062
规格：50T/24S
可见分光光度法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 20 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体 12mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂四 |
液体 20 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂五 |
液体 5 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准液 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 6 mL 试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用，用不完的试剂可以 2-8℃保存 4 周；
2、 标准液：20 μmol/mL 酪氨酸溶液。
产品说明：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。 中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。
需自备的仪器及用品：
可见分光光度计/酶标仪、可调式移液枪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水、研钵、30-50目筛。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释：取10μL 20μmol/mL酪氨酸标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.2μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要44μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3、 样本测定：
试剂名称
测定管
对照管
标准管
空白管
风干土样（g）
0.05
0.05
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试剂一（μL）
50
50
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试剂二（μL）
100
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充分混匀后，37℃水浴/恒温培养箱中反应24h，期间振荡5-6 次，使土样与反应液充分接触。
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试剂三（μL）
100
100
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-
试剂二（μL）
-
100
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混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液待测。
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上清液（μL）
44
44
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0.2μmol/mL标准液（μL）
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-
44
-
蒸馏水（μL）
-
-
-
44
试剂四（μL）
130
130
130
130
试剂五（μL）
26
26
26
26
充分混匀，40℃水浴或恒温培养箱培养 10min，10000rpm 室温离心 10min，取 200μL 上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A，分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
