货号:UPLC-MS-4022 规格:50T/24S 可见分光光度法
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 40 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 5 mL 试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 2-8℃保存两周。
2、 标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 试剂一溶解,制备 10 mg/mL 葡萄糖标准液备用,2-8℃保存两周。
S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
S-NI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征光吸收,在一定范围内540nm光吸收增加速率与NI活性成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、 蒸馏水、30-50目筛、甲苯(不允许快递)。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至540nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。
3、 标准液稀释表
序号 |
稀释前浓度(mg/mL) |
标准液体积(µL) |
试剂一体积(µL) |
稀释后浓度(mg/mL) |
1 |
10 |
50 |
950 |
0.5 |
2 |
0.5 |
160 |
40 |
0.4 |
3 |
0.5 |
120 |
80 |
0.3 |
4 |
0.5 |
80 |
120 |
0.2 |
5 |
0.5 |
40 |
160 |
0.1 |
6 |
0.5 |
32 |
168 |
0.08 |
7 |
0.5 |
24 |
176 |
0.06 |
8 |
0.5 |
16 |
184 |
0.04 |
备注:实验中每个标准管需 160µL 标准溶液。
4、 加样表:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
风干土样(g) |
0.02 |
0.02 |
- |
- |
试剂一(μL) |
- |
160 |
- |
160 |
试剂二(μL) |
160 |
- |
- |
- |
标准液(μL) |
- |
- |
160 |
- |
甲苯(μL) |
4 |
4 |
4 |
4 |
混匀,于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应1h后,煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),流水或冰浴冷却后充分混匀(以保证浓度不变),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。 |
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上清液(μL
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