货号：UPLC-MS-4022 规格：50T/24S 可见分光光度法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 40 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入 5 mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 2-8℃保存两周。
2、 标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 试剂一溶解，制备 10 mg/mL 葡萄糖标准液备用，2-8℃保存两周。
S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
S-NI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与NI活性成正比。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、 蒸馏水、30-50目筛、甲苯（不允许快递）。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。
3、 标准液稀释表
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
试剂一体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
10 |
50 |
950 |
0.5 |
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2 |
0.5 |
160 |
40 |
0.4 |
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3 |
0.5 |
120 |
80 |
0.3 |
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4 |
0.5 |
80 |
120 |
0.2 |
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5 |
0.5 |
40 |
160 |
0.1 |
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6 |
0.5 |
32 |
168 |
0.08 |
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7 |
0.5 |
24 |
176 |
0.06 |
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8 |
0.5 |
16 |
184 |
0.04 |
备注：实验中每个标准管需 160µL 标准溶液。
4、 加样表：
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试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
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风干土样（g） |
0.02 |
0.02 |
- |
- |
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试剂一（μL） |
- |
160 |
- |
160 |
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试剂二（μL） |
160 |
- |
- |
- |
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标准液（μL） |
- |
- |
160 |
- |
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甲苯（μL） |
4 |
4 |
4 |
4 |
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混匀，于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应1h后，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水或冰浴冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000rpm，常温离心10min，取上清待测。 |
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上清液（μL
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