1.原理
在适宜的酸性条件下,磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸铵,后者又能被还原剂(如维生素C、氯化亚锡等)还原成蓝色的磷钥蓝,其蓝色深浅与磷含量成正比。
2.仪器设备
1.721型分光光度计:1台。 | 2.分析天平(感量0.1mg):1台。 |
3.托盘天平(感量0.1g)。 | 4.恒温水浴附水浴试管架:1台。 |
5.试管:20mmX150mm7-10个。 | 6.量筒:100mL1个。 |
7.烧杯100mL、1000mL各1只。 | 8.容量瓶:100 mL、1000 mL各1只。 |
9.刻度吸管:10mL1支、5mL2支、1mL1支。 | 10.试剂瓶:1 000 mL、100 mL、60 mL各1个。 |
3.试剂
1. 3mol•L-1H2SO4溶液:用量筒量取166mL密度1.84g•mL-1的浓H2SO4,边搅拌边逐渐加人盛有500 mL蒸馏水的烧杯中,待溶液冷却后,移人1 000 mL容量瓶中,加水至刻度,摇匀即成。
2. 2.5%钼酸铵:称取化学纯的钼酸铵2.5 g,先在小烧杯中加少量蒸馏水溶解,然后移入100mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀即成。
3.10%维生素C:称取维生素C1g,加人10mL蒸馏水溶解即成,该溶液须临时配制,并贮于棕色瓶中,在冰箱中可存放一个月。
4.定磷试剂:按以下顺序及体积比例将各试剂混合即成。
蒸馏水:3 mol•L-1 H2SO4:2.5%铝酸铵:10%维生素C=2:1:1:1
新配的定磷试剂为淡黄色,极不稳定,每日须新配并贮于棕色瓶中,溶液变为棕黄色即不能;使用。
5.磷标准溶液:准确称取分析纯KH2PO40.4398g,溶于少量蒸馏水中,用100mL容量瓶定容至刻度,摇匀,即成含P100 mg•L-1的原液。使用前用10 mL刻度吸管吸取10 mL原液,加人100 mL容量瓶中,定容至刻度,即为含P10 mg•L-1的标准液。
4.材料
所收集的植物伤流液。
5.方法步骤
1.标准曲线的绘制:取6只试管,用玻璃铅笔编号,按下表顺序加人各种试剂。
试剂/mL | 管号 | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
含磷10mg•L-1标准液 | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸馏水 | 3.0 | 2.8 | 2.6 | 2.4 | 2.2 | 2.0 |
定磷试剂 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
含磷量/μg | 0 | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 10.0 |
加完试剂后摇匀,在45℃水浴中保温25 min,以空白作参照,在分光光度计下比色,读出吸:光度(波长650 nm)。
以含磷量/μg作横坐标,吸光度作纵坐标绘制标准曲线。
2.样品测定:取测磷的试管,按样品号码编号,依次加入伤流液1.0 mL,水2.0 mL,定磷试剂3.0mL,摇匀,在45℃水浴中保温25min,以空白作参照在分光光度计下比色,读出吸光度,并在标准曲线上查出无机磷含量。
伤流液中无机磷含量一般较高,据测定,在含磷丰富的丰产田中,开花至灌浆期的玉米伤流液含无机磷约在40-100 mgL-1范围内,测定时应适当稀释伤流液使无机磷含量在4-8mg•L-1的范围内。
3.计算结果
注意事项
根据所测伤流液无机磷含量的不同,必要时也要做适当的稀释
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到