1.范围

本方法适用于油菜籽中叶绿素含量的测定，不适用于油中叶绿素含量的测定。

2.原理

用特定的溶剂和合适的装置将样品中叶绿素提取出来，在分光光度计上检测叶绿素含量。

3.试剂

试剂除特殊标明外，均为分析纯。

提取溶剂：100mL无水乙醇加入300mL异辛烷（或2，2，5-三甲基戊烷）或戊烷或石油醚（特别是沸点在90℃~100℃之间的7碳化合物）。

4.仪器设备

分光光度计（具有波长扫描功能）：波带宽2nm，能测定600nm~700nm波长的吸收值。

5.扦样

扦样时要注意样品的代表性。

6.检测样品的准备

当油菜籽水分含量超过10%（质量分数）时，将油菜籽放在45℃条件下干燥12h，使其水分降到10%（质量分数）或更低，以免损坏叶绿素。

转移50g待测样于机械磨中，磨碎，若使用小型咖啡磨，则每次粉碎10g，然后将几次粉碎的样品充分混合。

7.操作步骤

（1）称样

称取2g（精确到0.001g）样品于提取管中。

（2）提取

①移液管移取30mL提取液到小管或装置中，若使用小管，则加入3个钢球至小管中，振摇提取1h；若为装置中，则需加入4个钢球，提取20min。

②静置10min，然后提取液中速率纸过滤至试管中，迅速盖好试管盖，尽量减少挥发，倒入石英杯中比色。

（3）测定

将提取液倒入石英杯中，分光光度计检测，检测吸收波长：665nm、705nm和625nm（705nm和625nm为校准基线）。

8.结果计算

叶绿素含量W用下式计算：

式中：W——叶绿素含量，mg/kg；

K——常数，等于13；

A校正——校正吸收值；

V——加入的提取液体积，mL；

m——称取量，g

L——光程，石英杯的厚度，cm；

A665——665nm处的吸收值；

A705——705nm处的吸收值；

A625——625nm处的吸收值。

若要换算成干基中的叶绿素含量，则应将样品水分含量计算进去，检测方法参考ISO665。

9.精密度

（1）重复性

短期内，同一台仪器、同一个操作者、同一个实验室、同一方法对同一个样品的两次重复的算术平均值应小于10%。

（2）重现性

使用相同的方法，在不同实验室，不同操作者，不同仪器同一样品的两次重复的算术平均值应小于20%