1. 样品及指标信息

样品：植物样本21份

指标：辣椒素（CAS号：404-86-4）

2. 实验方法简介

粉碎或捣碎均匀的样品中的辣椒素类物质用甲醇-四氢呋喃(1+1)混合溶剂经超声提取,然后用反相高效液相色谱-紫外可见光检测器进行色谱分析,采用外标法定量。

参考文献：

[1] GB/T 21266-2007 辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法

3. 主要试剂

1．水:符合GB/T6682-1992的一级。

2．甲醇:色谱纯。

3．四氢呋喃:色谱纯。

4．甲醇-四氢呋喃(1+1)混合溶剂

5．辣椒素标准物质(纯度>95%)。

6．辣椒素物质标准储备液:精确称取辣椒素标准物质0.0526g(精确到0.0001g),用甲醇溶解并定容至50.0mL。配成浓度均为1mg/mL的辣椒素的混合标准液,密封后贮于4℃冰箱中备用。

7．辣椒素物质标准使用液:分别吸取标准储备液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5 mL,用甲醇定容至25mL,此标准系列浓度为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL.60μg/mL、80μg/mL.100μg/mL。现配现用

4. 仪器和设备

1. 高效液相色谱仪(紫外检测器)

2. 分析天平(感量0.0001g)

3. 分析天平(感量0.001g)

4. 组织捣碎机

5. 烘箱(30℃~300℃可调)

6. 数控型超声波震荡器(超声工作频率:40kHz;温度可调:20℃~80℃)

7. 旋转蒸发器

8. 电动粉碎机(粒度≤0.391mm)

5. 分析步骤

1．样本制备

1．干辣椒:将样品用电动粉碎机粉碎,均过0.391mm筛,称取2.5g~5.0g样品(精确到0.001g。根据样品中辣椒素含量多少,取样量可适当增减)于100mL烧杯中。

试祥的制备

2．辣椒制品:将辣椒制品搅拌均匀,称取2.5g~5.0g样品(精确到0.001g。根据样品中辣椒素含量多少,取样量可适当增减)于100mL烧杯中。

3．新鲜辣椒或含水量>15%的辣椒制品:用组织捣碎机捣碎样品,然后称取10.0g样品(精确到0.001g。根据样品中辣椒素含量多少,取样量可适当增减),用烘箱在50℃下烘千至水分含量<15%。

2．样本提取

在样品中加入混合溶剂25mL,用保鲜膜封口,用针扎几个小孔,然后在60℃水浴条件下,使用超声波震荡器提取30min。用滤纸过滤,收集滤液,然后将滤渣连同滤纸重新加混合溶剂25mL,使用超声波震荡器提取10min,重复两次。将三次过滤收集的滤液合并,用旋转蒸发器在70℃温度下浓缩至10mL~20mL,然后用混合溶剂定容至50mL,经0.45μm滤膜过滤后进行色谱分析。根据样品中辣椒素类物质总量和检测器的灵敏度,必要时可以适当调整稀释倍数。

3．参考色谱条件

色谱柱:ZorbaxSB-C18  4.6mm×250mm  5μm(或相当型号色谱柱)。

流动相:甲醇十水(65+35)。

进样量:10μL。

流速:1mL/min。

紫外检测波长:280nm。

柱温箱温度:30℃。

6. 实验结果与分析

按本标准条件进行HPLC分析,用标准物质色谱峰的保留时间定性;根据辣椒素标准曲线及试样中的峰面积定量。根据辣椒中辣椒素的含量绘制标准曲线。

1．辣椒素计算

依据测定值公式计算。

式中:

W--试样中辣椒素的含量,单位为克每千克(g/kg);

C--由标准曲线上查到的辣椒素含量,单位为微克每毫升(μg/mL);

V--样品定容体积,单位为毫升(mL);

m--样品质量,单位为克(g)。

计算结果表示到小数点后三位。