货号:UPLC-MS-4139 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4138 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液一 |
液体 110 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
提取液二 |
液体 70 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 60 mL×1 瓶(自备) |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 3 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:自备浓硫酸。
2、 标准品:10 mg 半乳糖醛酸,临用前加入 0.943 mL 提取液二,配成 50 μmol/mL 的标准液。
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶(原果胶或碱溶性果胶)。果胶是一种天然高分子化合物,具有良好的胶凝化和乳化稳定作用,已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。
最低检出限:0.0237 μmol/mL
线性范围:0.0625-1.5 μmol/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
将组织样本捣碎,按照样本质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样本,加入 1mL 提取液一),置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min,取出冷却后于 5000g、25℃离心 10min,去掉上清,沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二,置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h,取出冷却后于 8000g、25℃离心 15min,取上清液待测。
试剂名称 |
空白管 |
标准管 |
对照管 |
测定管 |
样本(μL) |
- |
- |
100 |
100 |
标准品(μL) |
- |
100 |
- |
- |
蒸馏水(μL) |
100 |
- |
- |
- |
试剂一(μL) |
800 |
800 |
800 |
800 |
混匀、90℃放置10min,取出后冷却 |
||||
试剂二(μL) |
- |
- |
100 |
- |
试剂三(μL) |
100 |
100 |
- |
100 |
混匀,25℃静置 30min 后测定 530nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。ΔA标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。 |
以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。
2. 总果胶含量的计算:
总果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液二÷W=x÷W
V提取液二:加入提取液二的体积,1mL;W:样本质量,g。
1、 浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热、冷却后再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。
2、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
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