总果胶含量检测试剂盒-总果胶检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4139 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4138 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体 110 mL×1

4℃保存

提取液二

液体 70 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 60 mL×1 瓶(自备)

4℃保存

试剂二

液体 3 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 5 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:自备浓硫酸。

2 标准品:10 mg 半乳糖醛酸,临用前加入 0.943 mL 提取液二,配成 50 μmol/mL 的标准液。

产品说明:

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶(原果胶或碱溶性果胶)。果胶是一种天然高分子化合物,具有良好的胶凝化和乳化稳定作用,已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。

原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。

技术指标:

最低检出限:0.0237 μmol/mL

线性范围:0.0625-1.5 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

将组织样本捣碎,按照样本质量(g)和提取液一体积(mL) 1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样本,加入 1mL 提取液一),置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min,取出冷却后于 5000g、25℃离心 10min,去掉上清,沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二,置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h,取出冷却后于 8000g、25℃离心 15min,取上清液待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2. 标准品的制备:将50μmol/mL 标准液用提取液二稀释为1.5、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表:

试剂名称

空白管

标准管

对照管

测定管

样本(μL

-

-

100

100

标准品(μL

-

100

-

-

蒸馏水(μL

100

-

-

-

试剂一(μL

800

800

800

800

混匀、90℃放置10min,取出后冷却

试剂二(μL

-

-

100

-

试剂三(μL

100

100

-

100

混匀,25℃静置 30min 后测定 530nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。ΔA标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。

三、总果胶含量的计算

  1. 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。

2. 总果胶含量的计算:

总果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液二÷W=x÷W

V提取液二:加入提取液二的体积,1mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1 浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热、冷却后再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。

2 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


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