脂肪酶(LPS)活性检测试剂盒-脂肪酶(LPS)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4405 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4404 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 120 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 6 mL×1

常温保存

试剂三

液体 10 mL×1

4℃保存

标准品

液体 59.3 μL×1

4℃保存

溶液的配制:

标准品:临用前加入 1.435 mL 无水乙醇配成 125 µmol/mL 的油酸标准溶液,充分溶解。用前注意解冻溶解。

产品说明:

LPS又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

研钵/匀浆器、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/酶标板(非聚苯乙烯材质)、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织样本:称取约 0.1g 样本,加试剂一 1.0mL 充分研磨,于 4℃,15000rpm 离心 30min,取上清液待测。血清样本:直接检测。

二、测定步骤

1 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至710nm,甲苯调零。

2 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3 标准溶液的稀释:将125µmol/mL的油酸标准溶液用乙醇稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9µmol/mL的标准溶液待测。

4 操作表:

加入试剂(mL

空白管

测定管

标准管

试剂一

0.15

0.15

0.15

试剂二

0.05

0.05

0.05

反复震荡混匀

蒸馏水

0.08

 

 

上清液/血清

 

0.08

 

标准溶液

 

 

0.08

迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10 min

甲苯

0.4

0.4

0.4

反复震荡混匀后,室温4000rpm离心10 min

取出离心管,小心吸取上层溶液0.3 mL,加入另一2 mL塑料离心管中,按下表操作

试剂三

0.075

0.075

0.075

反复震荡混匀;室温 4000rpm 离心 10 min,小心吸取上层溶液 0.2mL,加入微量玻璃比色皿/酶标板中,于 710nm处测定吸光值。记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管,计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、LPS活性计算

1、标准曲线的绘制:以油酸标准溶液浓度为横坐标,ΔA标准为纵坐标,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程,得到x(µmol/mL)。

2、酶活计算:

        (1) 按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mg prot) =x×V样÷(Cpr×V样) ÷T= 0.1×x÷Cpr

(2) 按样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/g 质量) =x×V样÷(W×V样÷V提) ÷T= 0.1×x÷W

(3) 按血清计算

活性单位定义:37℃中每mL血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x

V样:加入反应体系中上清液体积,0.08mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定;T:催化反应时间,10min;W:样本质量,g;V提:提取液体积,1mL。

注意事项:

1 甲苯有毒,实验过程中需佩戴手套和口罩。

2 实验过程中须远离火源。

3 当吸光度大于1时,建议将样本稀释后测量。

4 如果用酶标板进行试验,建议选用非聚苯乙烯材质的96孔板。


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