脂蛋白酯酶(LPL)活性检测试剂盒-脂蛋白酯酶(LPL)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4415 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4414 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 60 mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×1

4℃保存

试剂三

液体 30 mL×1

4℃保存

标准品

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1、试剂二:临用前加入 1.5 mL 丙酮溶解备用;

2、标准品:5 μmol/mL 对硝基苯酚标准溶液。

产品说明:

脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯,主要在肝脏实质细胞中合成,在脂质代谢和转运中发挥重要作用。

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20% 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样本:直接检测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

2 5μmol/mL标准液用试剂一稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。

3 操作表:在1.5mL EP管中进行下列操作:

样本名称

对照管

测定管

标准管

空白管

样本(μL

100

100

-

 

标准管(μL

-

-

100

 

蒸馏水(μL

-

-

-

100

试剂一(μL

400

360

400

400

试剂二(μL

-

40

-

-

混匀,45℃水浴10min

-

-

试剂三(μL

500

500

500

500

充分混匀放置 2min 后,对照管和测定管 8000g 常温离心 10min,取上清、标准管和空白管于 1mL 玻璃比色皿中测定 400nm 处吸光值,记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管,ΔA=A 测定管- A 对照管, ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、LPL活性计算

1、血清(浆)LPL活力计算

单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每毫升血清每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/mL)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准

2、组织、细菌或细胞中LPL活力计算

          (1) 按样本质量计算

单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每克组织每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷W

(2) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷(V提取×Cpr)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷Cpr

(3) 按细菌或细胞数量计算:

单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每104个细胞每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA标准

C标准:标准溶液浓度,0.3125μmol/mL;V提取:加入试剂一体积,1mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万;1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol。

注意事项:

1 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。

2 若A大于1,将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。


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