上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4415 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4414 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 60 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、试剂二:临用前加入 1.5 mL 丙酮溶解备用;
2、标准品:5 μmol/mL 对硝基苯酚标准溶液。
脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯,主要在肝脏实质细胞中合成,在脂质代谢和转运中发挥重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样本:直接检测。
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、 将5μmol/mL标准液用试剂一稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表:在1.5mL EP管中进行下列操作:
样本名称 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本(μL) |
100 |
100 |
- |
|
标准管(μL) |
- |
- |
100 |
|
蒸馏水(μL) |
- |
- |
- |
100 |
试剂一(μL) |
400 |
360 |
400 |
400 |
试剂二(μL) |
- |
40 |
- |
- |
混匀,45℃水浴10min |
- |
- |
||
试剂三(μL) |
500 |
500 |
500 |
500 |
充分混匀放置 2min 后,对照管和测定管 8000g 常温离心 10min,取上清、标准管和空白管于 1mL 玻璃比色皿中测定 400nm 处吸光值,记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管,ΔA=A 测定管- A 对照管, ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 |
1、血清(浆)LPL活力计算
单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每毫升血清每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/mL)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准
2、组织、细菌或细胞中LPL活力计算
(1) 按样本质量计算
单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每克组织每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷W
(2) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷(V提取×Cpr)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷Cpr
(3) 按细菌或细胞数量计算:
单位定义:在45℃,pH7.5条件下,每104个细胞每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA标准
C标准:标准溶液浓度,0.3125μmol/mL;V提取:加入试剂一体积,1mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万;1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol。
1、 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。
2、 若A大于1,将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。
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