上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4265 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4264 | 规格:50T/48S |
紫外分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×2 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 15 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
-20℃保存 |
试剂三 |
液体 2 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 2.5 mL 双蒸水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15)是乙醇酸循环中的一种酶,也是植物光呼吸代谢中的关键酶,催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,通过测定乙醇酸氧化酶活性,可以了解植物光合和呼吸代谢的基本方法。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙,在 324nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板UV板、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液) 进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置冰上待测。
细胞或细菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min, 取上清置于冰上待测。
试剂名称 |
测定管 |
空白管 |
试剂一(μL) |
130 |
130 |
蒸馏水(μL) |
- |
10 |
样本(μL) |
10 |
- |
试剂二(μL) |
40 |
40 |
试剂三(μL) |
20 |
20 |
充分混匀,立即测定324nm处10s和190s吸光值A1和A2,计算ΔA测定管=A2测定-A1测定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次) |
1、 按微量石英比色皿计算:
(1) 按蛋白浓度计算
酶活定义:每毫克蛋白每分钟生成 1nmol 乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。GO 酶活(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×Cpr)÷T=392.16×ΔA÷Cpr
(2) 按样本质量计算
酶活定义:每克组织每分钟生成 1nmol 乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。
GO 酶活(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×W÷V 样总)÷T=392.16×ΔA÷W
(3) 按细胞数量计算
酶活定义:每万细胞每分钟生成 1nmol 乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。GO 酶活(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×500÷V 样总)÷T=0.784×ΔA
ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17000L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,2×10-4L;V 样:反应中样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL,蛋白浓度自行测定;W:样本质量,g;T:反应时间,3min;500:500 万个细胞;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
将上述公式中的 d-1cm 改为 d-0.6cm(96 孔 UV 板光径)进行计算即可。
1、 测定之前进行预实验,若吸光值 A1>1,请将样本用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2、 色素含量较高的样本,可在提取酶时加活性炭吸附。
3、 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,其 OD 值变化不超过 0.02。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到