上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4523	规格：100T/48S	微量法
货号：UPLC-MS-4522	规格：50T/24S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：每瓶临用前加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存 2 周；

2、 试剂三：临用前加入 5mL 蒸馏水，可 70-80℃加热溶解；2-8℃可以保存 3 个月

3、 试剂五：若出现沉淀，可 70-80℃加热溶解；

4、 标准品：10µmol/mL 亚硝酸钠标准溶液；

5、 工作液：临用前根据样本量将试剂四和试剂五按 1:1 的比例混合，现用现配。

产品说明：

亚硝酸还原酶（Nitrite reductase，NiR）是亚硝态氮还原过程中的关键酶，在自然界氮素循环过程中发挥着重要作用，其广泛存在于微生物及植物体内，能够催化亚硝酸盐还原，减少亚硝态氮在环境中的积累，降低其对生物体生长发育的毒害作用。

亚硝酸还原酶可将NO -还原为NO，使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO -减少，即540nm处吸光值的变化可反应样本中亚硝酸还原酶的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按样本质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10 比例（建议称取 0.1g 样本，加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于 4 ℃，10000g，离心 10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

2. 细菌或细胞：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000 : 1 的比例（建议 500 万细胞加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），然后于 4℃，10000g，离心 10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将10µmol/mL的标准溶液用蒸馏水等比稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125µmol/mL标准溶液待测。

3、 标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需 70µL 标准溶液。

4、 样本测定

三、亚硝酸还原酶活性计算

            1. 标准曲线的绘制