货号:UPLC-MS-4640 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4639 | 规格:50T/48S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液一 |
液体 20 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
提取液二 |
液体 20 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 A 液 |
液体 4 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 B 液 |
液体 16 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 15 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、试剂一:临用前将 A 液与 B 液按照体积比 1:4 混匀,根据试验所需量现配现用;
2、标准品:100μmol/mL 氮标准液。
血氨主要来源是内源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定状态,即血氨的来源和去路保持动态平衡。氨是有毒物质,主要在肝脏进行代谢解毒。当肝功能严重损害时,氨不能被解毒。氨在中枢神经系统聚集,从而导致肝性脑病。
本法根据氨的靛酚蓝反应原理,通过蛋白沉淀剂将血清(浆)中蛋白沉淀后,利用酚-次氯酸盐直接显色法测定血氨,生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比,在630 nm处有特殊吸收峰,据此可由吸光值计算出样本中血氨的含量。
最低检出限:0.0251 μmol/mL
线性范围:0.0625-8 μmol/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、蒸馏水、EP 管。
本试剂盒可测各种动物血清(浆)等样本中血氨的含量。
1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 630 nm,蒸馏水调零。
2、 标准品的准备:将 100 µmol/mL 的氮标准液用蒸馏水稀释至 6、4、2、1、0.5、0.25、0.125 µmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表:(在 1.5 mL EP 管中操作)
试剂名称(µL) |
空白管 |
测定管 |
标准管 |
血清(浆) |
|
50 |
|
标准品稀释液 |
|
|
50 |
蒸馏水 |
50 |
|
|
提取液一 |
125 |
125 |
125 |
提取液二 |
125 |
125 |
125 |
充分混匀,3500 rpm 离心 10 min,取上清待测 |
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上清液 |
100 |
100 |
100 |
试剂一 |
100 |
100 |
100 |
试剂二 |
100 |
100 |
100 |
充分混匀,37℃水浴 20 min |
|||
取 200 µL 反应液,于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定 630 nm 处吸光值 A,分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA= A 测定管-A 空白管,ΔA 标准= A 标准管-A 空白管。 |
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y= kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(µmol/mL)。
2、 血氨含量的计算:
血氨含量(μmol/mL)= x×V 样÷V 样= x V 样:加入的样本体积,0.05mL。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到