立即混匀，分别记录测定管和空白管 550nm 处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，测定管的记为 A1 测定管，A2 测定管，空白管的记为 A1 空白管，A2 空白管。计算 ΔA1=A1 测定管-A2 测定管，ΔA2=A1 空白管-A2 空白管，ΔA=ΔA1-ΔA2。

三、复合体Ⅳ活力单位的计算

按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。复合体Ⅳ活力(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr

V反总：反应体系总体积，8.4×10-4L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.04 mL； T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，需自行测定；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

注意事项：

1、 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 1），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若 ΔA 大于 0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使 A1-A2 小于 0.2，可提高检测灵敏度；若 ΔA 偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。

2、 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量（单独测量）。

3、 本试剂盒试剂足够完成 50 管反应。

4、 附:使用样本重量计算公式：（检测样本数为 50T/24S）

A、上清中复合体Ⅳ活力的计算：

单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=[ΔA上清×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=1099×ΔA上清÷W

ΔA上清：上清测定值；V反总：反应体系总体积，8.4×10-4L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.04mL；V提取：加入提取液体积，1.0mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

B、沉淀中复合体Ⅳ活力的计算：

单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。复合体Ⅳ活力(U/g 质量)=[ΔA沉淀×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样)÷T=440×ΔA沉淀÷W

ΔA沉淀：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，8.4×10-4L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104L/mol/cm；d： 比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.04mL；V提取：加入提取液体积，0.4mL； W：样本质量，g；T：反应时间，1min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

C、样本复合体Ⅳ总活力的计算：

样本复合体Ⅳ总活力即为上清中复合体Ⅳ活力与沉淀中复合体Ⅳ活力之和。 按样本质量计算：复合体Ⅳ（U/g 质量）=1099×ΔA上清÷W+440×ΔA沉淀÷W