尿素氮(BUN)含量检测试剂盒-尿素氮(BUN)检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-5143 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4519 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

粉剂×2

4℃保存

试剂二

液体 15 mL×1

4℃保存

试剂三 A

液体 3 mL×1

4℃保存

试剂三 B

液体 12 mL×1

4℃保存

试剂四

液体 10 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解,现用现配,4℃可保存一周。

2 试剂三:临用前将 A 液倒入 B 液中混合,或者根据比例(A:B=1:4)现用现配。

3 标准品:10 mg 尿素。临用前加入 4.66 mL 蒸馏水配制成 1 mg/mL 尿素氮标准液。

产品说明:

尿素(BUN)是人体蛋白质代谢的主要终末产物,BUN构成了血液中绝大部分的非蛋白质氮,血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N,生成的蓝色靛酚和尿素氮的浓度成正比。

技术指标:

最低检出限:0.00009 μg/mL

线性范围:0.78125-100 μg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:按照质量(g)﹕蒸馏水体积(mL) 1﹕5-10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 蒸馏水),冰上匀浆后于 4℃,13000g 离心 15min,取上清待测。

细菌或细胞:按照细胞数量(104 个)﹕蒸馏水体积(mL) 500-1000﹕1 的比例(建议 500 万个细胞加入 1mL 蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3s,间隔 7s,总时间 3min);然后 4℃,13000g 离心 15min,取上清置于冰上待测。

血清(浆)或其它液体:直接检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至630nm,分光光度计蒸馏水调零。

2. 将1mg/mL尿素氮标准液用蒸馏水稀释至25μg/mL备用。

3. 加样表:

试剂名称(μL

空白管

标准管

测定管

对照管

样本

 

 

30

30

标准品

 

30

 

-

蒸馏水

30

 

 

60

试剂一

60

60

60

-

试剂二

110

110

110

110

充分混匀,于37℃反应10min

试剂三

120

120

120

120

试剂四

90

90

90

90

充分混匀,37℃静置30min

蒸馏水

90

90

90

90

充分混匀后,从上述反应液中吸取 200μL 96 孔板/微量玻璃比色皿中测定 630nm 处吸光值,记为 A 白管、A 标准管、A 测定管和 A 对照管。计算 ΔA 标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。

三、计算公式

1. 按样本质量计算:

尿素氮含量(μg/g 质量)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷W=25×ΔA测定÷ΔA标准÷W

2. 按蛋白浓度计算:

尿素氮含量(μg/mg prot)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷(Cpr×V提取)=25×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

3. 按细胞数量计算:

尿素氮含量(μg/104 cell)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷细胞数量=25×ΔA测定÷ΔA标准÷细胞数量

4. 按液体体积计算:

尿素氮含量(μg/mL)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品=25×ΔA测定÷ΔA标准

C标准品:标准品浓度,25μg/mL;V提取:提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL 细胞数量:以万计。

注意事项:

如果样本吸光值大于 1.5,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。


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