上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加 5 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

2、 试剂二：临用前加入 0.5 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

3、 试剂三：临用前加入 0.5 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

4、 试剂四： 临用前加入 0.65 mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

5、 工作液：临用前根据用量将试剂一、试剂二、试剂三、试剂四、试剂五以 70:4:7:10:90 的比例混合（体积比）。现用现配。使用前室温孵育 20min（该步骤不可省略）。

产品说明：

肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） (EC 2.7.3.2)也成为肌酸磷酸激酶，主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中， 能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加，以此来表示CK酶活。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、恒温水浴锅、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液） 进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。2. 血清样本：直接测定。

3. 细胞样本：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）加入提取液，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g 离心10min，取上清待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，用蒸馏水调零。

2、 操作表：在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂

三、CK 活性计算

1、按微量石英比色皿计算

          (1) 按组织蛋白浓度计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。CK活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样×Cpr) ÷T=268×ΔA÷Cpr

(2) 按组织样本质量计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。CK活性（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样÷V样总×W) ÷T=268×ΔA÷W

(3) 按血清体积计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每mL血清每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。CK活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷V样÷T=268×ΔA

(4) 按细胞数量计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每1万个细胞每分钟催化产生1nmol  NADPH为一个酶活单位。CK活性（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=268×ΔA÷细胞数量

ε：NADPH的摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；V 样：反应体系中样本体积，0.04mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 细胞数量：以104为单位计算，万个；T：反应时间，3min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

2、按96孔UV板计算

将上述公式中的d=1cm改为0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。

注意事项：

1. 血清的CK不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。

2. 样本蛋白质含量需要另外测定。

3. OD 值大于 0.6 可用提取液适当稀释样本，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。

4. ΔA 空白管一般不超过 0.01。