肌酸含量检测试剂盒(酶法)-肌酸检测试剂盒(酶法)-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-6016 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-6015 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体 30 mL×1

4℃保存

提取液二

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×2

-20℃保存

试剂二

粉剂×2

-20℃保存

试剂三

粉剂×2

-20℃保存

试剂四 A

液体 15 mL×1

4℃保存

试剂四 B

液体 15 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

试剂一:临用前每支加入 1 mL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存。

试剂二:临用前每支加入 0.2 mL 蒸馏水,充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存。

试剂三:临用前每支加入 0.5 mL 蒸馏水(100T/48S),充分溶解。为方便储存故多给一支。用不完的试剂分装后-20℃保存。

试剂四:临用前根据试验所需用量,按照试剂四 A 液:试剂四 B 液=1:1,充分混匀,现用现配。

标准品:1 mg 一水肌酸。临用前加入 1 mL 蒸馏水,充分溶解,即 1 mg/mL 一水肌酸标准储备液。临用前取 20μL 80μL 蒸馏水混合配制成 200μg/mL 作为标准溶液待测。现用现配。

产品说明:

肌酸(Creatine)是一种含氮化合物,自然存在于脊椎动物体内,能够辅助为肌肉和神经细胞提供能量。肌酸可由精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)及甲硫氨酸(methionine)三种氨基酸合成,可由人体自行合成,也可以从食物中摄取。大约 95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式为磷酸肌酸。肌酸作为一种补充剂主要通过增加肌肉质量,增强运动表现能力。肌酸也被作为神经肌肉疾病的一种治疗药被广泛研究,它可能有助于保护神经和改善细胞生物功能状态。

肌酸酶偶联肌氨酸氧化酶,可将肌酸转化为甘氨酸、甲醛、过氧化氢,过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505nm 有特征吸收峰。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、超声破碎仪。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细菌、细胞样本的制备:按照细胞数量(104 个): 提取液一体积(mL) 500~1000 : 1 的比例(建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300W,超声 3 秒,间隔 9 秒,总时间 5 min); 4℃,12000 g 离心 10 min,取 0.8 mL 上清液,再加入 0.15 mL 提取液二,4℃,12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

2、组织样本的制备:按照质量(g): 提取液一体积(mL) 1: 5~10 的比例(建议称取约 0.1 g 组织,加入 1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于 4℃,12000 g 离心 10 min,取 0.8 mL 上清液,再加入 0.15 mL 提取液二,4℃,12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

3、血清(浆):取 100 μL 血清(浆)加入 1 mL 提取液一,4℃,12000 g 离心 10 min,取 0.8 mL 上清液,再加入 0.15 mL 提取液二,4℃,12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 505 nm,蒸馏水调零。

2 按下表步骤加样:

试剂名称(μL

测定管

对照管

空白管

标准管

样本

50

50

-

-

蒸馏水

-

50

50

-

标准溶液

-

-

-

50

试剂一

50

-

50

50

充分混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)条件下,反应 10 min

试剂二

5

5

5

5

试剂三

5

5

5

5

试剂四

400

400

400

400

充分混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)条件下,显色 30 min

蒸馏水

500

500

500

500

充分混匀,测定 505 nm 处的吸光度。分别记为 A 测定、A 对照、A 空白、A 标准。ΔA 测定=A 测定-A 对照,ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注:空白管只需做 1-2 次。

三、肌酸含量计算

1 计算公式

            (1) 按照蛋白浓度计算

肌酸含量(μg/mg prot)=C 标×ΔA 测÷ΔA 标×V 样÷(V 样×Cpr)×0.879=175.8×ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr

(2) 按照样本质量计算

肌酸含量(μg/g 质量)=C 标×ΔA 测÷ΔA 标×(V 上清+V 提取液二)÷(W×V 上清÷V 提取液一)×0.879=208.76×ΔA 测÷ΔA 标÷W

(3) 按照细菌或细胞数量计算

肌酸含量(μg/104 cell) = C 标×ΔA 测÷ΔA 标×(V 上清+V 提取液二)÷(细胞数量×V 上清÷V 提取液一)×0.879= 208.76×ΔA 测÷ΔA 标÷细胞数量

(4) 按照血清(浆)体积计算

肌酸含量(μg/mL) =C 标×ΔA 测÷ΔA 标×(V 上清+V 提取液二)÷ [V 液体×V 上清÷(V 提取液一+V 液体)]×0.879=2296.39×ΔA 测÷ΔA 标

C 标:标准管浓度,200 μg/mL;V 样:加入样本体积,50 μL=0.05mL;V 上清:提取时上清液体积,0.8 mL;V 提取液一:加入提取液一体积,1 mL;V 提取液二:加入提取液二体积,0.15 mL;W:样本质量,g;Cpr 样本蛋白浓度,mg/mL;细胞数量:以 104 计;V 液体:液体样本体积,0.1 mL;0.879:换算系数,一水肌酸相对分子质量 149.15,无水肌酸相对分子质量 131.13,0.879=131.13÷149.15。

注意事项:

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