上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

试剂一：临用前每支加入 1 mL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存。

试剂二：临用前每支加入 0.2 mL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存。

试剂三：临用前每支加入 0.5 mL 蒸馏水（100T/48S），充分溶解。为方便储存故多给一支。用不完的试剂分装后-20℃保存。

试剂四：临用前根据试验所需用量，按照试剂四 A 液：试剂四 B 液=1:1，充分混匀，现用现配。

标准品：1 mg 一水肌酸。临用前加入 1 mL 蒸馏水，充分溶解，即 1 mg/mL 一水肌酸标准储备液。临用前取 20μL和 80μL 蒸馏水混合配制成 200μg/mL 作为标准溶液待测。现用现配。

产品说明：

肌酸(Creatine)是一种含氮化合物，自然存在于脊椎动物体内，能够辅助为肌肉和神经细胞提供能量。肌酸可由精氨酸（arginine)、甘氨酸（glycine）及甲硫氨酸（methionine）三种氨基酸合成，可由人体自行合成，也可以从食物中摄取。大约 95%的肌酸存在于骨骼肌中，主要存在形式为磷酸肌酸。肌酸作为一种补充剂主要通过增加肌肉质量，增强运动表现能力。肌酸也被作为神经肌肉疾病的一种治疗药被广泛研究，它可能有助于保护神经和改善细胞生物功能状态。

肌酸酶偶联肌氨酸氧化酶，可将肌酸转化为甘氨酸、甲醛、过氧化氢，过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505nm 有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、超声破碎仪。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞样本的制备：按照细胞数量（104 个）: 提取液一体积（mL）为 500~1000 : 1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300W，超声 3 秒，间隔 9 秒，总时间 5 min）；于 4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL 提取液二，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

2、组织样本的制备：按照质量（g）: 提取液一体积(mL)为 1: 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于 4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL 提取液二，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

3、血清（浆）：取 100 μL 血清（浆）加入 1 mL 提取液一，4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL 提取液二，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 505 nm，蒸馏水调零。

2、 按下表步骤加样：

注：空白管只需做 1-2 次。

三、肌酸含量计算

1、 计算公式

            （1） 按照蛋白浓度计算

肌酸含量（μg/mg prot）=C 标×ΔA 测÷ΔA 标×V 样÷（V 样×Cpr）×0.879=175.8×ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

肌酸含量（μg/g 质量）=C 标×ΔA 测÷ΔA 标×（V 上清+V 提取液二）÷（W×V 上清÷V 提取液一）×0.879=208.76×ΔA 测÷ΔA 标÷W

（3） 按照细菌或细胞数量计算

肌酸含量(μg/104 cell) = C 标×ΔA 测÷ΔA 标×(V 上清+V 提取液二)÷(细胞数量×V 上清÷V 提取液一)×0.879= 208.76×ΔA 测÷ΔA 标÷细胞数量

（4） 按照血清（浆）体积计算