谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(WST 法)-谷氨酸(Glu)检测试剂盒(WST 法)-上海液质



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货号:UPLC-MS-6012 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-6011 规格:50T/24S 可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 70mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 2.5mL×1

2-8℃保存

试剂三

粉剂×2

-20℃保存

试剂四

粉剂×2

-20℃保存

试剂五

液体 12mL×1

2-8℃保存

标准液

液体 0.5 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂三:临用前取 1 瓶加入 18mL 试剂一充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;

2 试剂四:临用前取 1 支加入 1.2 mL 试剂二充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存 2 周,避免反复冻融;

3 标准品液:10 μmol/mL 谷氨酸标准品。

产品说明:

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH +,在1-mPMS作用下,WST-1可与NADH反应,产生水溶性formazan,计算谷氨酸含量。

技术指标:

最低检出限:0.009 μmol/mL

线性范围: 0.019-0.3125 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌、细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),10000g,常温离心 10min,取上清待测。

组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一,进行冰浴匀浆,10000g,常温离心 10min,取上清待测。液体:直接测定。(若有浑浊则离心后取上清测定)

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至450nm,蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备:将标准品用蒸馏水分别稀释为0.3125,0.15625,0.078125,0.039,0.0195、0.01μmol/mL的标准溶液。

3. 标准品稀释表:

序号

稀释前浓度(µmol/mL

标准液体积µL

蒸馏水体积(µL

稀释后浓度µmol/mL

1

10

30

930

0.3125

2

0.3125

500

500

0.15625

3

0.15625

500

500

0.078125

4

0.078125

500

500

0.039

5

0.039

500

500

0.0195

6

0.0195

500

500

0.01

实验中每个标准管需200µL标准溶液。

三、谷氨酸含量计算

1. 标准曲线的绘制:根据标准管的浓度(x,µmol/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA代入方程得到x(µmol/mL)。

2. 谷氨酸含量计算:

(1) 按照蛋白浓度计算:

谷氨酸含量(µmol/mg prot)=x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr

(2) 按照样本质量计算:

谷氨酸含量(µmol/g 质量)=x×V样本÷(W÷V样总×V样本)=x÷W

(3) 按照细菌或细胞数量计算:

谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷(500÷V样总×V样本)=0.002x

(4) 按照液体体积计算:

谷氨酸含量(μmol/mL)=x×V样本÷V样本=x

V样总:加入提取液体积,1mL;V样本:加入的样本体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意事项:

1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


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