上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4321	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4320	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 提取液：内含不溶物，使用前摇匀；

2、 试剂一的配制：临用前配制，将试剂一 B、试剂一 C 加入到试剂一 A 中并充分溶解。-20℃分装保存，可保存 1 个月。

3、 试剂二 B：临用前加入 0.3mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存两周。

4、 试剂二 C：临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存两周。

5、 试剂二的配制：临用前配制，取 1.305mL 试剂二 A、0.12mL 试剂二 B、0.075mL 试剂二 C 混合（共 1.5mL， 约 75T），现用现配。

产品说明：

PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+； NADH在340nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量石英比色皿/ 96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。16000g，4℃离心 20min，取上清， 置冰上待测。

2、组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰上充分研磨。16000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、操作步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 根据样本数取适量试剂一、试剂三37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴提前预热30min.

3、 操作表：

迅速混匀后于 340nm 比色，记录 10s 和 70s 的吸光值，测定管的记为 A1 和 A2，空白管的记为 A3 和 A4，计算 ΔA=（A1-A2）-（A3-A4）。（空白管只需做 1-2 次）

三、PDC活性计算

A. 使用微量石英比色皿测定的计算：

1、血清（浆）PDC活力的计算：

单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1μmol

NADH氧化定义为一个酶活力单位。

PDC（U/mL）=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷V样本÷T=1.6×ΔA

2、 组织中PDC活力的计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1μmol

NADH氧化定义为一个酶活力单位。

PDC（U/mg prot）=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷(V样本×Cpr)÷T=1.6×ΔA÷Cpr

（2） 按样本质量计算：

单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每g组织质量在反应体系中每分钟催化1μmol

NADH氧化定义为一个酶活力单位。

PDC（U/g 质量）=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V样本)÷T=1.6×ΔA÷W

3、细菌或细胞中PDC活力的计算： 按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1μmol 的NADH氧化定义为一个酶活力单位。

PDC（U/104 Cell）= ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷(V样本÷V提取×500)÷T =3.2×10-3×ΔA