丙酮酸(PA)含量试剂盒-丙酮酸(PA)检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号:UPLC-MS-4310 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4309  规格:50T/48S 可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 50 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 9 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 50 mL×1

4℃保存

标准液

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1、标准液:丙酮酸钠,1 mg/mL。

产品说明:

丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。

技术指标:

最低检出限:0.0813 μg/mL

线性范围:0.09765-25 μg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体 积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W 超声3s,间隔10s,重复30次),静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。

3、血清(浆)样本:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆 加入1mL  提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

2、标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0.39、0μg/mL。

3、取300μL标准品或样本+100μL试剂一于1.5mL EP管中,混匀,静置2min,加入500μL试剂二,混匀,于520nm波长处测定吸光值A。

三、丙酮酸含量计算

1、根据标准品浓度和测定值建立标准曲线;x为丙酮酸钠含量(μg/mL),y为吸光值。

2、按照血清(浆)体积计算

丙酮酸含量(μg/mL)= (x×V1)÷[V1÷(V2+V3)×V3]=11x 3、按照样本蛋白浓度计算

丙酮酸含量(μg/mg prot)=(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr 4、按照样本质量计算

丙酮酸含量(μg/g 质量)=(x×V1)÷(W×V1÷V2)=x÷W 5、按照细菌或细胞数量计算

丙酮酸含量(μg/104 cell)=(x×V1)÷(500×V1÷V2)=x÷500

V1:加入反应体系中样本体积,0.3mL;V2:加入提取液体积,1mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1mL;Cpr 样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


上一篇:丙酮酸羧化酶(PC)活性检测试剂盒-丙酮酸羧化酶(PC)试剂盒-上海液质
下一篇:丙二醛(MDA)含量检测试剂盒-丙二醛(MDA)检测试剂盒-上海液质

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.078077s