上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4174 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4173 | 规格：50T/24S | 可见分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体50 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
液体10 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2支 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体13 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂四 |
液体2.5 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1试剂二：临用前取1 支加入0.6mL 蒸馏水，缓慢加热，逐渐升温至沸腾，使其充分溶解，2-8℃保存4 周。
产品说明：SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE 活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
淀粉和碘结合后在660nm 有特征光吸收，SBE 可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm 吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/ 匀浆器、冰、蒸馏水。
称取约0.1g组织加入1mL 提取液，冰浴中匀浆。15000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至660nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 样本测定：
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试剂名称（μL） |
对照管 |
测定管 |
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煮沸1min后灭活的样本 |
63 |
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样本 |
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63 |
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试剂一 |
80 |
80 |
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试剂二 |
8 |
8 |
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混匀，37℃水浴锅/恒温培养箱准确保温20min，置沸水浴中1min终止反应（盖紧防止水分散失），冷却 |
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试剂三 |
124 |
124 |
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试剂四 |
25 |
25 |
混匀，室温静置10min，取200μL 至微量玻璃比色皿/96 孔板中，660nm处读取各管吸光值，分别记为A 对照管、A 测定管。每个测定管需设一个对照管。
注意：若有样本浑浊，建议离心后取上清测定。
三、SBE活力单位计算
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在1mL反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/mg prot)=（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管×V 反应×100%÷1%÷（Cpr×V 样本）÷T
=23.8×（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管÷Cpr
2、按照样本质量计算
单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在1mL反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/g 质量)=（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管×V 反应×100%÷1%÷（W÷V 提取×V 样本）÷T
=23.8×（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管÷W
V 样本：加入样本体积，0.063mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V 反应：反应体系体积，0.3mL；T：反应时间，20min。
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在1mL反应体系中每分钟降低0.5%碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/mg prot)=（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管×V 反应×100%÷0.5%÷（Cpr×V 样本）÷T
=47.6×（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管÷Cpr
2、按照样本质量计算
单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在1mL反应体系中每分钟降低0.5%碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/g 质量)=（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管×V 反应×100%÷0.5%÷（W÷V 提取×V 样本）÷T
=47.6×（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管÷W
V 样本：加入样本体积，0.063mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V 反应：反应体系体积，0.3mL；T：反应时间，20min。
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四、注意事项 |
2、试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
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