上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 120 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 22 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后 10 天内有效。
2、 试剂二:临用前加 1 mL 蒸馏水充分溶解。
3、 标准品:10 mg 半胱氨酸,临用前加入 1.157 mL 提取液,得到 1000 μg/mL 氮标准液。
氮素是构成生物体的一种必需元素。氨态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570nm有特征吸收峰;通过测定570nm吸光度, 来计算氨基酸含量。
最低检出限:24.2 μg/mL
线性范围:25-400 μg/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,室温匀浆后于 25℃,12000g 离心 10min,取上清待测。
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 将1000μg/mL氮标准液用提取液分别稀释为400、300、200、100、50、25 μg/mL。
3. 操作表:
试剂名称(μL) |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
15 |
- |
- |
标准品 |
- |
15 |
- |
提取液 |
- |
- |
15 |
试剂一 |
150 |
150 |
150 |
无水乙醇 |
150 |
150 |
150 |
试剂二 |
15 |
15 |
15 |
充分混匀后盖紧瓶盖封口膜封口(防止水分散失),置于沸水浴中保温 10min,冷却后反复颠倒 EP 管数次, 将测定管 8000rpm 离心 5min 后取上清,吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或者 96 孔板中,于 570nm 测定吸光值。显色后务必在 30min 内测完。计算 ΔA=A 测定管-A 空白管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
1. 标准曲线的绘制:
以各个氮标准液为横坐标,其对应的ΔA标准为纵坐标,建立标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程中,得到x (μg/mL)。
2. NH3-N含量的计算:
(1) 按样本质量计算:NH3-N含量(μg/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W
(2) 按蛋白浓度计算:NH3-N含量(μg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取)=x÷Cpr W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;V提取:样本提取液总体积,1mL。
为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
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