植物氨态氮含量检测试剂盒



产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 120 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂二

粉剂×2

4℃保存

试剂三

液体 22 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后 10 天内有效。

2 试剂二:临用前加 1 mL 蒸馏水充分溶解。

3 标准品:10 mg 半胱氨酸,临用前加入 1.157 mL 提取液,得到 1000 μg/mL 氮标准液。

产品说明:

氮素是构成生物体的一种必需元素。氨态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570nm有特征吸收峰;通过测定570nm吸光度, 来计算氨基酸含量。

技术指标:

最低检出限:24.2 μg/mL

线性范围:25-400 μg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

按照质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,室温匀浆后于 25℃,12000g 离心 10min,取上清待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,分光光度计蒸馏水调零。

2. 将1000μg/mL氮标准液用提取液分别稀释为400、300、200、100、50、25 μg/mL。

3. 操作表:

试剂名称(μL

测定管

标准管

空白管

样本

15

-

-

标准品

-

15

-

提取液

-

-

15

试剂一

150

150

150

无水乙醇

150

150

150

试剂二

15

15

15

充分混匀后盖紧瓶盖封口膜封口(防止水分散失),置于沸水浴中保温 10min,冷却后反复颠倒 EP 管数次, 将测定管 8000rpm 离心 5min 后取上清,吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或者 96 孔板中,于 570nm 测定吸光值。显色后务必在 30min 内测完。计算 ΔA=A 测定管-A 空白管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、植物氨态氮含量计算

1. 标准曲线的绘制:

以各个氮标准液为横坐标,其对应的ΔA标准为纵坐标,建立标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程中,得到x (μg/mL)。

2. NH3-N含量的计算:

(1) 按样本质量计算:NH3-N含量(μg/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W

(2) 按蛋白浓度计算:NH3-N含量(μg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取)=x÷Cpr W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;V提取:样本提取液总体积,1mL。

注意事项:

为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


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