上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 2 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 4 mL×1 瓶 |
常温保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂二:用时加入 1 mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
2、 标准品:用时加入 1 mL 蒸馏水充分溶解,制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用;用不完的试剂 4℃保存一周。
蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。本试剂盒采用3,5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理
是3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、标准品的制备:将标准品用蒸馏水稀释至2.5、2、1.5、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mg/mL(0mg/mL为空白管)。
3、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
试剂一 |
15 |
15 |
15 |
蒸馏水 |
15 |
|
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样本 |
30 |
30 |
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标准品 |
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|
30 |
试剂二 |
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15 |
15 |
置于25℃准确水浴 10min |
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试剂三 |
30 |
30 |
30 |
混匀,100℃水浴 10min 左右(盖紧,防止水分散失),冷却至室温 |
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蒸馏水 |
210 |
210 |
210 |
混匀,取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定各管 540nm 吸光值,ΔA=A 测定管-A 对照管。(每个测定管需设一个对照管)
1、 标准曲线的建立:
以标准品的浓度为 x 轴,540nm 下的吸光度(ΔA 标准=A 标准管-A 空白管)为 y 轴,绘制标准曲线。根据标准曲线,将∆A(y)带入公式中计算出 x 值(mg/mL)。
2、按照蛋白浓度计算:
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。蔗糖酶活力(U/mg prot)=(1000×x×V1)÷(V1×Cpr)÷T=100×x÷Cpr
3、按照样本质量计算:
单位定义:每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。蔗糖酶活力(U/g 质量)=(1000×x×V1)÷(W÷V2×V1)÷T=100×x÷W
1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
当 A 大于 1.2 时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。
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