2、测定前根据实验用量取出部分试剂一、试剂二、试剂三和试剂四置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他动物）预热 10min 以上。

3、加样表（在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列试剂)：

将上述试剂分别加入1mL 玻璃比色皿后迅速吹打混匀，记录第30s 的吸光值A1 以及10min30s 时的吸光值A2， 计算 ΔA =A2-A1。若一次性测定样本过多，可根据使用量将试剂一、二、三、四按 5:1:2:1 比例配成工作液后进行预热，测定时按照 100μL 样本+900μL 工作液加入 1mL 玻璃比色皿进行测定。

三、Mnp 活力的计算

1. 按样本蛋白质浓度计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每 mg 组织蛋白每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活单位。Mnp 活性（U /mg prot）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样×Cpr)÷T=82.64×ΔA÷Cpr

2. 按样本质量计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每 g 组织每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活单位。Mnp 活性（U /g 质量）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×W)÷T=82.64×ΔA÷W

3. 按细菌/细胞数量计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每 104 细菌/细胞每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活单位。Mnp 活性（U /104 cell）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T=82.64×ΔA÷细胞数量

4、 按照样本体积计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每 mL 血清或液体样本每分钟消耗 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。

Mnp 活性（U/mL）=ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷V 样÷T= 82.64×ΔA

ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100 L/mol/cm；d:比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.001L；V 样：加入样本体积，0.1mL，V 样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10 min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

注意事项：

当 A1 大于 1.2 或者 ΔA 大于 0.5 时，建议将样本用试剂一稀释后测定；当 ΔA 过小时，可以适当加大样本量后重新进行测定。注意同步修改计算公式。