上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 125 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
常温保存 |
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标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存一周；
2、 试剂二：临用前加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存一周；
3、 标准品：10 μmol/mL 标准磷贮备液；
4、 工作液（定磷剂）的配制：按 H2O：试剂一：试剂二：试剂三=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、易矿化有机态磷以及某些已溶解的沉淀态磷酸盐，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。
用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收， 即可计算磷含量。
最低检出限：0.0061 μmol/mL
线性范围：0.03125-6 μmol/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30-50目筛、漩涡震 荡仪、研钵、EP管、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样风干，过 30-50 目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为 1：10-20 的比例（建议称取约 0.05g
土样，加入 1mL 提取液），振荡提取 1h，10000g，25℃离心 10min，取上清液待测。二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、 将10μmol/mL标准液用提取液稀释为3、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL的标准溶液备用。
3、 标准溶液稀释表：
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序号 |
稀释前浓度（μmol/mL） |
标准液体积（µL） |
提取液体积（µL） |
稀释后浓度（μmol/mL） |
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1 |
10 |
150 |
350 |
3 |
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2 |
10 |
100 |
400 |
2 |
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3 |
2 |
250 |
250 |
1 |
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4 |
1 |
250 |
250 |
0.5 |
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5 |
0.5 |
250 |
250 |
0.25 |
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6 |
0.25 |
250 |
250 |
0.125 |
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7 |
0.125 |
250 |
250 |
0.0625 |
4、 样本测定：(在1.5mL离心管中或96孔板依次加入下列试剂)
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测定管 |
标准管 |
空白管 |
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样本（µL） |
20 |
- |
- |
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标准溶液（µL） |
- |
20 |
- |
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提取液（µL） |
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20 |
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工作液（µL） |
180 |
180 |
180 |
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充分混匀，25℃静置30min |
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将液体置于微量玻璃比色皿/96孔板中，测定660nm处吸光值A，分别记为A测定管、A标准管和A空白管，ΔA=A 测定管-A空白管，ΔA标准=A标准管-A空白管（空白管只需测1-2次）。 |
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1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将ΔA 带入方程得到 x（μmol/mL）。
2、 速效磷含量的计算：
速效磷含量（μmol/g 质量）=x×V 样÷（V 样×W÷V 样总）=x÷W
V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
1、工作液（定磷剂）应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管或 EP 管等试验器材均要求严格无磷。
3、显色结束后应立即检测。
4、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
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