上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号：UPLC-MS-4033 规格：100T/48S 微量法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
-20℃保存 |
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试剂三 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 试剂二：临用前取1瓶加入2.5 mL蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周；
2. 标准品：5 mmol/L的对硝基苯酚溶液。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶体中的一种酸性水解酶。其活性变化与机体 某些病理状态密切相关。
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、 冰、30-50目筛、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至400nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释：临用前取20μL 5 mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂一，充分混匀，配制成100 μmol/L标准液使用，现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3、 加样表：
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试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
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风干土样（g） |
0.03 |
0.03 |
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试剂一（μL） |
142 |
142 |
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试剂二（μL） |
38 |
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混匀，于37℃水浴锅/恒温培养箱反应1h 后，立即沸水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水/冰浴冷却。 |
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试剂二（μL） |
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38 |
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12000g 25℃离心10min，取上清液 |
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上清液（μL） |
100 |
100 |
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标准品（μL） |
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100 |
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蒸馏水（μL） |
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100 |
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试剂三（μL） |
200 |
200 |
200 |
200 |
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室温静置2min后，10000g 常温离心5min，吸取200μL上清于微量玻璃比色皿或直接在96孔板中， 测定400nm处的吸光值A。分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。空白管和标准管只需做1-2次。 |
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单位的定义：每天每g土样中产生1μmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力（U/g 土样）=ΔA测定÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T =0.432× ΔA÷ΔA标准÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：1.8×10-4 L；C标准：标准溶液浓度，100μmol/L；W：样本质量，g。
当ΔA大于1时，建议将上清液稀释后进行测定；当ΔA小于0.02时，建议延长反应时间。计算公式中注意乘以稀释倍数或注意反应时间变化。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
