土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)活性检测试剂盒



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号:UPLC-MS-4025                                    规格:100T/48S                                 微量法

货号:UPLC-MS-4024                                   规格:50T/24S                                 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 0.5mL×1 支(自备)

2-8℃保存

试剂二

粉剂×2

-20℃保存

试剂三

液体 15 mL×1

2-8℃保存

试剂四

液体 30 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:自备甲苯,2-8℃保存;

2 试剂二:临用前取 1 瓶加入 5 mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周;

3 标准品:5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。

产品说明:

S-α-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分   之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

S-α-GC能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50      目筛、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献) 

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30-50 目筛。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,分光光度计蒸馏水调零。

2 标准品:取20μL 5mmol/L的对硝基苯酚溶液,加入980μL蒸馏水,充分混匀,配制成100μmol/L标准液使用, 现用现配。(实验中每管需要100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)

3 加样表:

试剂名称

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g

0.02

0.02

-

-

试剂一(μL

5

5

-

-

振荡混匀,使土样润湿,室温放置15min

-

-

试剂二(μL

80

-

-

-

试剂三(μL

100

100

-

-

混匀, 37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。

-

-

试剂二(μL

-

80

-

-

10000rpm 25℃离心10min,取上清液

-

-

上清液(μL

100

100

-

-

标准品(μL

-

-

100

-

蒸馏水(μL

-

-

 

100

试剂四(μL

200

200

200

200

充分混匀,室温静置 2min 后,测定吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管设一个对照管。标准管和空白管只需做 1-2 次

三、S-α-GC 活力计算

单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-α-GC活力(U/g 土样)=ΔA÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:1.85×10-4L;C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;W 样本质量,g。

注意事项:

若ΔA<0.01,可延长37℃水浴时间;若ΔA>1.5,可将上清液稀释后进行测定;最后计算时注意各个因素的改变。

 


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