土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)活性检测试剂盒




试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 2 mL×1 瓶(自备)

2-8℃保存

试剂二

液体 10 mL×1

2-8℃保存

试剂三

粉剂×2

-20℃保存

试剂四

液体 30 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:甲苯自备。

2 试剂三:临用前取 1 瓶加入 5 mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周;

3 标准品:5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。

产品说明:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37,β-XYS)于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶, 产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

S-β-XYS催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在400nm处有特征吸收峰,测定400nm光吸收增加速率,可计算S-β-XYS活性。


注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、30-50 目筛、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30-50目筛。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至400nm,分光光度计蒸馏水调零。

2 标准溶液的稀释:临用前取20μL 5 mmol/L的对硝基苯酚溶液,加入980μL试剂二,充分混匀,配制成100 μmol/L标准液使用,现用现配。(实验中每管需要100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)

3 加样表:

试剂名称

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g

0.02

0.02

-

-

试剂一(μL

5

5

-

-

振荡混匀,使土样全部潮湿,室温放置15min

-

-

试剂二(μL

100

100

-

-

试剂三(μL

80

-

-

-

混匀, 50℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。

 

-

 

-

试剂三(μL

-

80

-

-

10000rpm 25℃离心10min,取上清液

-

-

上清液(μL

100

100

-

-

标准品(μL

-

-

100

-

蒸馏水(μL

-

-

-

100

试剂四(μL

200

200

200

200

充分混匀,室温静置 2min,10000g 常温离心 5min,取上清于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定吸光值 A,分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管设一个对照管。空白管和标准管只需做 1-2 次。

三、S-β-XYS活力计算

单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-β-XYS活力(U/g 土样)=ΔA测定÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T =0.444×ΔA÷ΔA标准÷W

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:1.85×10-4L;C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;W 样本质量,g。


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