土壤硝酸还原酶(S-NR)活性检测试剂盒



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货号:UPLC-MS-4005          规格:100T/48S                微量法

货号:UPLC-MS-4004       规格:50T/24S                 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 25 mL×1

-20℃保存

试剂二

液体 5 mL×1

-20℃保存

试剂三

液体 5 mL×1

2-8℃保存

试剂四

液体 5 mL×1

-20℃保存

试剂五

液体 10 mL×1

2-8℃保存

试剂六

液体 10 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 1 mL×1

-20℃保存

溶液的配制:

1 试剂五:如出现结晶析出,60℃水浴溶解后使用;

2 标准品:10μmol/mL 亚硝酸钠。

产品说明:

S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥,降低氮   素的损失具有重要意义。

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ +NADH+H NO2ˉ +NAD+H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及 α -萘胺定量生成红色偶氮化合物;未反应的NADH会抑制后续的显色反应,用PMS将其中和后再进行后续反应;生成的红色偶氮化合物在 520 nm 有最大吸收峰,可用分光光度计/酶标仪测定。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、30-50目筛、微量玻璃比色皿/96      孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:


一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。

二、测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,分光光度计用蒸馏水调零。

 

2 NaNO2标准液的配制:用蒸馏水将标准品稀释10.80.60.40.2μmol/mL

3 标准品稀释表:

序号

稀释前浓度(µmol/mL

标准液体积(µL

蒸馏水体积(µL

稀释后浓度(µmol/mL

1

10

100

900

1

2

1

160

40

0.8

3

1

120

80

0.6

4

1

80

120

0.4

5

1

40

160

0.2

备注:实验中每个标准管需50µL标准溶液。

4 样本测定:

 

试剂名称

1.5mLEP

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g

0.05

0.05

 

 

NaNO2标准液(μL

 

 

50

 

蒸馏水(μL

50

50

 

50

试剂一(μL

180

180

180

180

试剂二(μL

18

 

18

18

混匀后,置于37℃水浴锅/恒温培养箱反应24h


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