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货号:UPLC-MS-4005 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4004 规格:50T/24S 可见分光光度法
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 25 mL×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂二 |
液体 5 mL×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂四 |
液体 5 mL×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂五 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂六 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
-20℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂五:如出现结晶析出,60℃水浴溶解后使用;
2、 标准品:10μmol/mL 亚硝酸钠。
S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥,降低氮 素的损失具有重要意义。
S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及 α -萘胺定量生成红色偶氮化合物;未反应的NADH会抑制后续的显色反应,用PMS将其中和后再进行后续反应;生成的红色偶氮化合物在 520 nm 有最大吸收峰,可用分光光度计/酶标仪测定。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、30-50目筛、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 NaNO2标准液的配制:用蒸馏水将标准品稀释1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL。
3、 标准品稀释表:
序号 |
稀释前浓度(µmol/mL) |
标准液体积(µL) |
蒸馏水体积(µL) |
稀释后浓度(µmol/mL) |
1 |
10 |
100 |
900 |
1 |
2 |
1 |
160 |
40 |
0.8 |
3 |
1 |
120 |
80 |
0.6 |
4 |
1 |
80 |
120 |
0.4 |
5 |
1 |
40 |
160 |
0.2 |
备注:实验中每个标准管需50µL标准溶液。
4、 样本测定:
试剂名称 |
1.5mLEP管 |
|||
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
|
风干土样(g) |
0.05 |
0.05 |
|
|
NaNO2标准液(μL) |
|
|
50 |
|
蒸馏水(μL) |
50 |
50 |
|
50 |
试剂一(μL) |
180 |
180 |
180 |
180 |
试剂二(μL) |
18 |
|
18 |
18 |
混匀后,置于37℃水浴锅/恒温培养箱反应24h |
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