淀粉是多糖聚合物,可用Cacl2-HOAc(相对密度1.3,pH2.3)为分散和液化剂,在一定的酸度和加热条件下,使淀粉溶解和部分酸解,生成具有一定旋光性的水解产物,可用旋光计测定。用此法时,各种淀粉的水解产物的比旋指定为203.全国谷物淀粉分析方法标准化研究协作组认为,本法结果的重复性好,操作简便、快速。
旋光计:电热恒温甘油浴(±1℃)。
1、待测液制备
称取磨细谷物样品2. 500g,放人250mL三角瓶中(同时测定水分),加入Cacl2-HOAc溶液10mL和6个~8个小玻璃球或大粒石英砂,轻轻摇匀,不要让样品粘在瓶底。再用Cacl2-HOAc溶液50mL沿瓶壁淋洗附着在瓶壁上的样品,盖上小漏斗,放在118°士1C恒温油浴中,使之在5min内达到恒温,继续恒温加热25min。在加热过程中不要搅拌,使其自然分散水解(可用玻棒将瓶壁附着物推至液面以下)。煮毕立即取出,置于流水冷却槽中充分冷却(约15min)。然后用30mL左右水分次无损地冲洗全部内容物转人100mL容量瓶中,加入硫酸锌溶液1mL,充分摇匀后再加入亚铁氰化钾溶液1mL,再摇匀,如有泡沫,可加几滴乙醇消除之,用水定溶,用中速滤纸过滤,弃去初滤液(15mL~20mL)。取澄清液待测。
2、测定
先用清亮的待测液洗旋光管2次~3次,然后将溶液装满管中,使管口液体呈一凸起,将活动的圆玻璃片与旋光管垂直方向插入盖上(可避免留有气泡)。将管盖扭紧,检查管中是否有气泡。然后测读旋光仪上的旋光度或检糖计上的°S,取3次测读的平均数。
式中:α——旋光角度的读数;l——旋光管长(dm);m——样品质量(g);203——淀粉的比旋。
1、Cacl2-HOAc溶液的酸度必须调节至pH2.3(用酸度计调试),若pH>2.5,易使分散液粘稠,难于过滤;若pH<2.5,易引起淀粉进一步水解而降低比旋。
2、样品中含有水溶性糖类,须先用80%乙醇洗糖,但绝大多数谷物种子水溶性糖含量甚微,一般可忽略不计,不必进行脱糖手续。
3、Cacl2-HOAc溶液应在放入甘油浴前约5min加入,以防样品粘附在瓶底,影响分散效果。
4、试验证明,在加热初期搅拌,淀粉易结块;但在放入甘油浴前必须轻轻摇动,使样品均匀分散在Cacl2-HOAc介质中,勿使样品粘在瓶底,必要时可用铲形玻棒将其搅开,加热后使其自然水解,测定结果的重复性较好。
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