1.原理

      C18胶柱（Sep-PaK C18 Cartridge)可根据样品溶质极性不同，分离水溶液中或极性较大的水和有机溶剂的混合物。当甲醇或丙酮等有机溶剂的提取液通过C18柱时，能有效地去除脂溶性色素，C18柱分离法常常用于酶联免疫吸附（ELISA）检测植物激素的样品前处理。

2.仪器设备

(1)C18胶柱分离装置；
(2)2 mL离心管：2支。

3.试剂

(1)80%甲醇；(2)纯甲醇；(3)乙醚

4.方法步骤

4.1.样品提取：准确称取植物鲜样1.0000 g.精确至0.100 mg,分三次加入预冷的80%甲醇 3〜4 mL,在冰浴中研磨提取3次（在弱光下进行），合并提取液并定容到5 mL,在4 ℃下 5000 g离心10 min.上清液在一40℃黑暗中可保存一月。暂时不进行分析的样品，可以在称取 鲜重后，加入3 mL80%甲醇，密封保存在一20℃冰箱中。

4.2.分离与纯化：C18胶柱分离纯化装置如上图所示，
其分离过程如下。

(1)新柱的前处理
①用4 mL纯甲醇湿润胶柱，然后排除甲醇
②用4 mL80%甲醇漂洗胶柱，然后排除漂洗液。

(2)加入样品：将步骤1中离心后的上清液（约 2〜3 mL）加入到处理好的胶柱上，控制流速至每分钟30滴左右，弃去开始流出的纯化液约0.5 mL 收集中段流出液1〜1.5 mL备用。

(3)旧胶柱的再生：分离过1个样品后，胶柱就成了旧柱，必须经过再生才能进行下一个样品的分离。
①先用4 mL甲醇漂洗胶柱,排除甲醇:
②用4 mL乙醚通过胶柱，洗去亲脂色素，排除乙醚 (当胶柱上色素残留较多时，可重复此步驟);
③用4 mL80%甲醇漂洗胶柱，然后排除漂洗液；
④可进行下一个样品的分离纯化。
随提取样品液中亲脂色素含量不同，一般每支胶柱可重复使用15〜20次。处理过的样品在 一40℃下保存备用。

5.注意事项

（1）.所用材料必须新鲜，随取随用，避免取样时间过长引起内源激素含量改变,
（2）.在提取、分离和纯化过程中必须保持低温环境，并避免强光照射。