本文介绍了植物样品维生素E含量的测定方法，包括维生素E测定的原理，实验所需试剂，实验步骤以及实验注意事项。

原理：

      许多植物体中都含有维生素E，如莴苣、禾本科植物、大豆和许多植物种子的胚及深绿色蔬菜的叶子。测定中可以将样品经乙醇-KOH溶液皂化后，维生素E存在于不皂化物中，再用乙醚或其他有机溶剂提取不皂化物。也可用有机溶剂直接提取。

      维生素E（化学名称为生育酚）具有还原性，它可以将三价铁还原成二价铁，生成二价铁再与4，7-二苯基-1，10菲绕啉试剂反应，生成一种红色的络合物，这是利用分光光度计测定维生素E的基础。为了避免丁基羟基茴香醚（BHA）及二丁基羟基甲苯（BHT）对测定的干扰，可先将维生素抽提液进行柱层析，再将层析得到的样品混合物进行薄层层析分离，可得到纯化的维生素E，利用这种方法甚至可以成功地分离7中维生素E的混合物。

试剂

方法步骤：

(1).样品制备和提取：称取样品5〜10 g剪碎与适量无水Na2SO4 —起研磨成粉状，置于索氏提取器中。加入100 mL无水乙醇及少量沸石，在瓶上划一个溶液液面的标线，装好仪器。加热提取16 h，冷却，补加无水乙醇到原来的液面标线。将提取液转入分液漏斗，用100 mL水、 50 mL沸程为60〜71 ℃石油醚洗涤容器，全部转入分液漏斗中，加入0.5 g无水Na2SO4，振动摇晃提取10 min。静置分层，弃去水相，将醚层定容到50 mL。

(2).提取液的皂化和重新提取：将样品醚提取液置于皂化瓶中，在氮气流下挥发除去溶剂。 残留的脂质中加入4 mL无水乙醇、0.3 g维生素C，装上回流管，在水浴上加热至沸、再加入 1 ml KOH溶液，回流15 min,将皂化液置流水中快速冷却，转入分液漏斗，加入20 mL水，再用 3份25 mL乙醚提取不皂化物，合并醚层，用等体积的水洗涤醚层，直到水不呈碱性。将醚层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在氮气流下挥发至约为5 mL体积，将其全部转入10 mL容量瓶中， 用乙醚定容到10 mL。

(3).如样品中含水量较高则采取直接提取法，样品不经皂化而用有机溶剂如热的乙醇或丙二醇及氯仿在索氏提取器中直接提取，将脂溶性物质提出来，提取得到的脂溶性物质在低温下 (-65〜-70℃)冷却结晶，脂质的结晶经过滤分离除去，而游离的维生素E则被收集于滤液中 (用丙酮与干冰的混合物可以获得-70℃的低温）。

(4).薄层层析分离：移取样品不皂化物的醚提取液或滤液适量（约含生育酚为10〜20 μg)，放入容量1.8 mL的小瓶中，在氮气流下挥发至剩下 0.1〜0.2 mL，用微量注射器将其全部点到薄层板的左下方，斑点直径不要超过2 mm,在斑点的右下侧2cm的地方，同时取10μL标准溶液 (内含生育酚1μg•μL-1)点于该处。在氮气流下将板干燥后置于层析槽中进行第一相展开，用下表中的第一相展开剂，展开至溶剂前沿达到15〜16 cm，取出后在氮气流下干燥，将层析板逆时针方向旋转90°，置层析槽中用表中第二相展开剂展开，直到溶剂前沿达到15〜16 cm。取出， 在氮气流下干燥。用二氯荧光素的乙醇溶液喷板，干燥后，在紫外灯下标出样品及标准液的生育酚的斑点位置。关闭紫外灯，刮下样品斑点、标液斑点及相应的空白位置，连同Al2O3 —起分别放入三个25 mL的瓶子中，每一瓶中预先装有1.4 mL菲绕啉溶液，加盖、振荡、放置15 min后供比色测定用

(5).比色测定：取1.0 ml经薄层层析后得到的样品液、标准试液及空白液，置于3支离心管中，各加入0.3mL FeCl3溶液，摇匀。15s后再加入0.3mL H3PO4溶液，摇匀，3min后生成白色的络合物（颜色在90min内可保持稳定）。将其350g离心，取上清液置于比色杯中，以空白液调节仪器零点，测定样品液及标准液534nm处的吸光度。

(6).结果计算

式中，A：样品液测得的吸光度；A':标准液测得的吸光度；W：点于薄层板上标准α-生育酚的重量（μg）；W’:所取样品的总量（g）；Vt：样品不皂化物的醚提取液总体积（mL）；Vs：点于薄层板上样品不皂化物醚提取液的体积（mL）；1/1000：μg与mg的换算系数。