原理

膜脂主要包括磷脂和糖脂。样品经高温处理以除去水分并使脂酶钝化，用氯仿-甲醇溶液研磨抽提总脂，再用石油醚反复冲洗去除中性脂，得到膜的极性脂，碱性条件下膜脂与甲醇反应产生高级脂肪酸甲酯。

      获得的高级脂肪酸甲酯注入气相色谱柱，通过汽化室汽化后被载气带入分离柱，根据各组分在分离柱中保留时间不同而被分离。用标准脂肪酸的保留时间（所谓的保留时间Rt:理论上是指样品在分离柱中运行所用的时间，实际中是以加样为起始零时间，物质到达检测器达到浓度最大时为终止时间，从起始零时间到终止时间为保留时间）定性各组分。用面积归一法（所谓面积归一法是将各组分色谱峰的总面积之和视100,各组分的峰面积在其中所占的百分比为各组分的相对值的定量方法）定量计算各种脂肪酸含量。

仪器设备

（1）气相色谱仪 （2） 色谱工作站或积分仪
（3）LKB油脂快速提取仪 （4） 烘箱
（5）分液漏斗 （6）1mL移液管
（7）10mL带塞刻度试管 （8）60目的筛
（9）100 mL量筒

试剂

(1).氯仿-甲醇溶液1：2（体积比） (2).氯仿
(3).0.76%NaCl溶液 (4)甲醇饱和的石油醚溶液
(5).石油醚-苯溶液：将一份石油醚（30-60℃沸程）与等体积的苯混合（体积比）即可。
(6).0.4 mol·L-1 KOH-甲醇溶液：称取22.4g KOH溶于甲醇中，并定容至1000mL。
(7).无水乙醇。
(8).脂肪酸标样：棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生酸等。

方法步骤

1.总脂的抽提

(1).取适量植物样品，100℃烘30〜60 min,以便除去水分和钝化脂酶。取出样品冷却至室温，粉碎后过60目的筛，称过筛后的样品5g放入滤纸筒.在上面覆盖一层脱脂棉，装入LKB油脂快速提取仪的样品室，浸泡于约60 mL氯仿-甲醇提取液中，开循环冷却水室温过夜或 10h。

(2).打开加热开关并调节温度旋钮，使提取液处于微沸状态，维持1 h后关闭加热开关。

(3).打开提取仪样品室的旋钮，使提取液流入蒸馏瓶（预先加几粒玻璃珠）,打开回流加热开关.调节温度调节旋钮，蒸馏蒸馏瓶中的提取液，并使冷却后的液体流过样品室再回到蒸馏瓶中，如此回流提取1 h,关闭加热开关。目的是淸洗样品室壁和滤纸筒中黏附的残留脂。

(4).关闭提取仪旋钮，取出滤纸筒。

(5).打开回流加热开关，再将蒸馏瓶中的样品蒸发至只含少量提取液，关闭加热开关。

(6).再将蒸馏瓶取下于100℃烘烤1 h,烘干提取液获得总脂。

2.膜脂的抽提

将获得的总脂溶于甲醇饱和的石油醚溶液中，充分振荡，静置分层后，回收下层甲醇溶液。如此重复2〜3次，最后浓缩甲醇溶液获得膜脂。

3.膜脂脂肪酸的甲酯化

(1).取膜脂0.1 mg于10 mL 具塞试管中，加1mL石油醚-苯混合液使之溶解，再加 0.4 mol•L-1 KOH-甲醇溶液1mL, 充分振荡后室溫反应20〜60 min(夏季20 min,冬季 60 min) 。

(2).加入蒸馏水使上层有机相至约10 mL刻度处，再充分混匀后静置，直至溶液分为清晰可辨的上下两层。

(3).如果有机相混浊，加入2〜3滴无水乙醇，静置片刻，待用。

4. 称取标样各0. 1 mg,分别溶于1mL 的苯：石油醚=1 : 1(体积比）中，0.4mol•L-1 KOH-甲醇溶液甲基化30 min.重复3（2）〜3(3)步骤

5.仪器条件

(1).柱型：6%〜10%DEGS(聚二乙二醇丁二酸酯),101白色硅烷化担体(酸洗）。

(2).温度：液化室250 ℃，柱温195℃,检测器250℃。

(3).气体流速：载气（N2）流速，30 mL•min-1；
H2 流速，40 mL•min-1;
空气流速，30 mL•min-1.

(4).信号调节：1×102或1×10.。

6.进样

(1).用微量进样器吸取标样上层有机相各1μL进样，同时启动色谱工作站记录色谱峰和相关数据（主要为Rt和峰面积），记为Rt0.

(2).用微量进样器吸取样品1μL进样，同时启动色谱工作站记录色谱峰和相关数据，记为Rtx。

7.结果计算

(1).定性（标准物质定性法）：通过样品与标准的保留时间和峰面积进行比较，确定样品中HFA（高级脂肪酸）的类型。当样品中某峰的Rtx与Rt0相同，则样品中此峰便与Rt0所对应的HFA为同一HFA。

(2).定量（面积归一法）。

式中，Pi：某脂肪酸的百分含量；A1、A2、A3···An：各脂肪酸的峰面积；Ai：被测脂肪酸的峰面积。可以由色谱工作站或积分仪自动给出。

注意事项

(1).步骤1（1）将过筛后的样品放入滤纸筒后，在上面一定要覆盖一层脱脂棉，但不能太厚。。
(2).步骤1（2）打开加热开关注意调节温度旋钮，一定要使提取液保持微沸状态，切忌温度不能太高。
(3).保证被分析的样品清亮。