单糖组成分析是研究多糖结构、性质及构效关系的基础。其研究中主要包括多糖水解的方法和条件、衍生化方法和单糖检测方法，如图1所示。常用的水解方法主要有酸水解法和酶解法，此外还有氧化降解法、超声降解法、辐射降解法等。由于单糖不具有紫外与荧光吸收，检测时常将其进行衍生化处理。单糖组成最常用的检测方法一般有4种，分别是气相色谱法(GC)、高效液相色谱(HPLC)、离子色谱法 (IC) 和薄层色谱法(TLC)。

图1：多糖的单糖组成分析步骤与方法^[1]

GC法-上海液质检测

     GC法较早用于分析多糖单糖组成，方法灵敏度高，各单糖的色谱峰的分离度良好。由于单糖不具有挥发性，采用GC法测定时，常对单糖进行硅烷化或乙酸酯化处理，使其成为易挥发且对热稳定的衍生物。GC法只适合测定中性多糖，不适宜测定糖醛酸及N-乙酰氨基糖的检测^[2]。GC法测定多糖的单糖组成，常用的检测器包括氢火焰检测器(FID)、质谱检测器 (MS)。

HPLC法-上海液质检测

    HPLC法是测定多糖单糖组成的常用方法之一，较GC法更适用于单糖组成较为复杂的多糖检测。HPLC法常使用键合相硅胶柱（如C18柱）和氨基柱。目前基于离子交换、空间排阻、配位交换、分配吸附等多种分离原理的新型糖分析柱也日益应用广泛，如SugarS系列、SugarKS系列、AsahipakGS-220HQ、AsahipakNH2P系列色谱柱等。HPLC法检测单糖时，常用检测器主要有紫外检测器(VWD)、荧光检测器 (FLD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散色检测器(ELSD)、电喷雾检测器(CAD)、电化学检测器 (ECD)、二极管阵列检测器(DAD)，各检测器特征比较如表1所示。根据所用检测器的不同，可分为衍生化后测定和直接测定2种情况。一是联用DAD、VWD或FLD时，水解后的单糖需衍生化处理才能被测定，实验室常用的衍生试剂如1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP） ^[3]。此法可检测酸性、中性和碱性多糖的单糖组成^[4]，但用于酮糖测定的衍生化法很少；二是联用RID、ELSD、ECD、CAD时，可无需对单糖进行衍生化。

表1：HPLC法联用的各检测器特征比较

图2：HPLC法单糖标准品图

IC法-上海液质检测

    IC法是一种新型液相色谱技术，基于离子型化合物中的离子成分，可与离子柱表面的带电荷基团发生可逆性交换的原理，实现各化合物的分离。多糖水解后可直接通过IC法测定其单糖组成^[5]。

图3：IC法单糖标准品图

TLC法-上海液质检测

使用TLC法测定单糖组成时，多糖水解后无需衍生化。TLC法常用薄层板为硅胶G板和微晶纤维素板、活性炭层析柱，常用展开剂和显色剂见图1。TLC法有操作方便、分离快速、设备简单等优点，但其对单糖的分离度低，实验条件如温度、湿度、操作者的实验水平等，对实验结果的影响较大，在灵敏度和准确度上低于HPLC法，常用作定性分析。

上海液质检测-糖类检测项目表

✎ 参考文献 

[1] 万晓莹,刘振丽,宋志前,等. 中药多糖定性鉴别与糖谱的研究进展.中国中医基础医学杂志,2021,27(5):876-881;

[2] 刘源才,孙细珍,许银,等．枸杞多糖组成及含量测定方法的改进.食品科学,2013, 34(12) :292-295;

[3] 付海宁,赵峡,于广利,等．盐藻多糖单糖组成分析的四种色谱方法比较.中国海洋药物, 2008,27(4):30-34;

[4] DENG Y， HAN BX， HU DJ， et al． Qualitation and quantification of water soluble non-starch polysaccharides from Pseudostellariaheterophylla in China using saccharidemapping and multiple chromatographic methods．Carbohydor Polym，2018，199: 619-627;

[5] 赵彪希,张海德, 张媚健等．冬虫夏草多糖单糖组成及免疫活性研究. 食品工业科技, 2020,41(13):27-31.