血清总铁结合能力(TIBC)检测试剂盒-血清总铁结合能力(TIBC)试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4638 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4637 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 30 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 1 mL×1

4℃保存

试剂四 A

液体 2.5 mL×1

4℃保存

试剂四 B

液体 2.5 mL×1

4℃保存

试剂五

液体 12 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂四:临用前根据用量将 A 液和 B 液按 1:1 混合;

2 标准品:临用前加入 0.9mL 蒸馏水溶解,得到 40μmol/mL FeSO4•7H2O 溶液。再用蒸馏水稀释至 0.5μmol/mL标准液备用。

产品说明:

血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力,其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。

Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物,在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下,血清转铁蛋白可以与Fe3+结合, 剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+,此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关;酸化后,转铁蛋白结合的Fe3+释放, 并且进一步被还原成Fe2+,此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。A2减A1与TIBC呈正比。

技术指标:

最低检出限:第一次测量的检出限为 0.00098 μmol/mL;第二次测量的检出限为 0.0012 μmol/mL。

线性范围: 第一次测量的线性范围为 1.95×10-3-0.5 μmol/mL 第二次测量的线性范围为 1.95×10-3-0.5μmol/mL。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、EP管、蒸馏水。

操作步骤:

一、测定步骤(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 562nm,分光光度计蒸馏水调零。

2、样本测定(在 EP 管中加入下列试剂)

试剂名称(μL

测定管

空白管

标准管

血清

40

-

-

标准液

-

-

40

蒸馏水

-

40

-

试剂一

280

280

280

试剂二

40

-

-

试剂三

-

40

40

混匀,37℃10min

试剂四

40

40

40

混匀,37℃反应 5min,吸取 200μL 于微量比色皿或者 96 孔板中,测定 562nm 处吸光值,分别记为 A1 测、A1 空、A1 标,并计算 ΔA1 =A1 -A1 空、ΔA1 = A1 -A1 空。测定完成后将反应液吸回各 EP 管中。再继续加入试剂五。

试剂五

120

120

120

混匀,37℃反应 5min,吸取 200μL 于微量比色皿或者 96 孔板中,测定 562nm 处吸光值,分别记为 A2

测、A2 空、A2 标,并计算 ΔA2 =A2 -A2 空、ΔA2 = A2 -A2 空。空白管和标准管只需做 1-2 次。

二、血清总铁结合力计算:

总铁结合能力定义:37℃条件下,每升血清结合 Fe3+ μmol 数。

总铁结合能力 TIBC(μmol/L)=C 标准×ΔA2 测÷ΔA2 标-C 标准×ΔA1 测÷ΔA1 标=500×(ΔA2 测÷ΔA2 标-ΔA1 测÷ΔA1 标)

C 标准:标准液浓度,0.5μmol/mL=500μmol/L;V 样:加入血清样本体积,0.04mL=40×10-6L。

注意事项:

1. A小于 0.1 时,样本适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。

2. 试剂二、试剂四有一定的毒性,操作时请做好防护措施。


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