上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4638 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4637 | 规格:50T/48S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
试剂四 A |
液体 2.5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂四 B |
液体 2.5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂五 |
液体 12 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂四:临用前根据用量将 A 液和 B 液按 1:1 混合;
2、 标准品:临用前加入 0.9mL 蒸馏水溶解,得到 40μmol/mL FeSO4•7H2O 溶液。再用蒸馏水稀释至 0.5μmol/mL标准液备用。
血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力,其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物,在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下,血清转铁蛋白可以与Fe3+结合, 剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+,此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关;酸化后,转铁蛋白结合的Fe3+释放, 并且进一步被还原成Fe2+,此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。A2减A1与TIBC呈正比。
最低检出限:第一次测量的检出限为 0.00098 μmol/mL;第二次测量的检出限为 0.0012 μmol/mL。
线性范围: 第一次测量的线性范围为 1.95×10-3-0.5 μmol/mL; 第二次测量的线性范围为 1.95×10-3-0.5μmol/mL。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、EP管、蒸馏水。
一、测定步骤(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 562nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、样本测定(在 EP 管中加入下列试剂)
试剂名称(μL) |
测定管 |
空白管 |
标准管 |
血清 |
40 |
- |
- |
标准液 |
- |
- |
40 |
蒸馏水 |
- |
40 |
- |
试剂一 |
280 |
280 |
280 |
试剂二 |
40 |
- |
- |
试剂三 |
- |
40 |
40 |
混匀,37℃,10min |
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试剂四 |
40 |
40 |
40 |
混匀,37℃反应 5min,吸取 200μL 于微量比色皿或者 96 孔板中,测定 562nm 处吸光值,分别记为 A1 测、A1 空、A1 标,并计算 ΔA1 测=A1 测-A1 空、ΔA1 标= A1 标-A1 空。测定完成后将反应液吸回各 EP 管中。再继续加入试剂五。 |
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试剂五 |
120 |
120 |
120 |
混匀,37℃反应 5min,吸取 200μL 于微量比色皿或者 96 孔板中,测定 562nm 处吸光值,分别记为 A2 测、A2 空、A2 标,并计算 ΔA2 测=A2 测-A2 空、ΔA2 标= A2 标-A2 空。空白管和标准管只需做 1-2 次。 |
总铁结合能力定义:37℃条件下,每升血清结合 Fe3+的 μmol 数。
总铁结合能力 TIBC(μmol/L)=C 标准×ΔA2 测÷ΔA2 标-C 标准×ΔA1 测÷ΔA1 标=500×(ΔA2 测÷ΔA2 标-ΔA1 测÷ΔA1 标)
C 标准:标准液浓度,0.5μmol/mL=500μmol/L;V 样:加入血清样本体积,0.04mL=40×10-6L。
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