上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-6028
规格:100T/48S
微量法
货号:UPLC-MS-6027
规格:50T/24S
可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
液体 60mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 A |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
试剂三 B |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加入 25mL 试剂二,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;用不完的试剂 2-8℃保存 1 个月。
2、 试剂三的配制:将试剂三 A 倒入试剂三 B 中,用蒸馏水定容至 20mL,2-8℃避光保存一个月。
3、 标准品:10mg 淀粉标准品。临用前加 10mL 试剂二,置于常温水中并加热至煮沸,配成 1mg/mL 淀粉标准液。用不完的试剂 2-8℃保存 1 个月。
产品说明:
血清淀粉酶( Serum amylase, AMY) 属于 α-淀粉酶,以无规则方式水解多糖分子内部的 α-1,4 糖苷键,生成寡聚糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。AMY 主要由唾液腺和胰腺分泌,另外近端十二指肠、肺、子宫、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。
AMY 催化淀粉分子中的α-1,4 糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等,碘可以与未被水解的淀粉结合, 生成在 570nm 下有特征吸收峰的复合物,其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅/培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。取 100μL 血清和 400μL 蒸馏水混合(即将血清稀释 5 倍),分为 2 管 250μL 分别作为测定管和对照管。若实验后所测数值偏大或者偏小,可以调整稀释比例(比如数值偏小可以将 200μL 血清和 300μL 蒸馏水混合即将血清稀释 2.5 倍)
二、测定步骤和加样表
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 570nm,蒸馏水调零。
2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为 0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL 的标准溶液。
3、 按操作表依次加入各试剂:
试剂(μL) |
测定管 |
对照管 |
空白管 1 |
标准管 |
空白管 2 |
血清稀释液 |
250 |
250 |
- |
- |
- |
蒸馏水 |
- |
- |
250 |
- |
250 |
标准溶液 |
- |
- |
- |
250 |
- |
试剂一 |
500 |
- |
500 |
- |
- |
试剂二 |
- |
500 |
- |
500 |
500 |
在 37℃恒温水浴中准确保温 10min |
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试剂三 |
250 |
250 |
250 |
250 |
250 |
混匀后于 15min 内测定 570nm 处测定管、对照管、空白管 1、标准管、空白管 2 的吸光度,分别记为 A 测定、A 对照、A 空白 1、A 标准和 A 空白 2,计算ΔA 测定=(A 空白 1-A 空白 2)-(A 测定-A 对照),ΔA 标准=A 标准-A 空白 2。标准曲线、空白管 1、空白管 2 做 1-2 次即可。
三、AMY 活性计算
1、 标准曲线的绘制
以 ΔA 标准为 y 轴,以标准溶液浓度为 x 轴,绘制标准曲线,得到方程 y=kx+b。将 ΔA 测定带入方程得到 x(mg/mL)。
2、按照血清体积计算:
单位定义:每mL血清每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。
AMY活性 (U/mL)= x×V 样÷V 样÷T ×F =0.1×x ×F
V样:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;T:反应时间,10min;F:稀释倍数。
注意事项:
1. ΔA 测定大于 1.5 时,可以对样本进行适当稀释后测定。
2. 反应完成后需在 15min 内测定吸光度。
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