血清淀粉酶(AMY)活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)-血清淀粉酶(AMY)试剂盒(碘-淀粉比色法)-上海液质



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货号:UPLC-MS-6028 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-6027 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

粉剂×1

2-8℃保存

试剂二

液体 60mL×1

2-8℃保存

试剂三 A

粉剂×1

2-8℃保存

试剂三 B

粉剂×1

2-8℃保存

标准品

粉剂×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前加入 25mL 试剂二,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;用不完的试 2-8℃保存 1 个月。

2 试剂三的配制:将试剂三 A 倒入试剂三 B 中,用蒸馏水定容至 20mL,2-8℃避光保存一个月。

3 标准品:10mg 淀粉标准品。临用前加 10mL 试剂二,置于常温水中并加热至煮沸,配成 1mg/mL 淀粉标准液。用不完的试剂 2-8℃保存 1 个月。

产品说明:

血清淀粉酶( Serum amylase AMY) 属于 α-淀粉酶,以无规则方式水解多糖分子内部的 α-1,4 糖苷键,生成寡聚糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。AMY 主要由唾液腺和胰腺分泌,另外近端十二指肠、肺、子宫、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。

AMY 催化淀粉分子中的α-1,4 糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等,碘可以与未被水解的淀粉结合, 生成在 570nm 下有特征吸收峰的复合物,其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、恒温水浴锅/培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤

一、粗酶液提取

取 100μL 血清和 400μL 蒸馏水混合(即将血清稀释 5 倍),分为 2 管 250μL 分别作为测定管和对照管。若实验后所测数值偏大或者偏小,可以调整稀释比例(比如数值偏小可以将 200μL 血清和 300μL 蒸馏水混合即将血清稀释 2.5 倍)

二、测定步骤和加样表

1 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 570nm,蒸馏水调零。

2 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为 0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL 的标准溶液。

3 按操作表依次加入各试剂:

试剂(μL

测定管

对照管

空白管 1

标准管

空白管 2

血清稀释液

250

250

-

-

-

蒸馏水

-

-

250

-

250

标准溶液

-

-

-

250

-

试剂一

500

-

500

-

-

试剂二

-

500

-

500

500

37℃恒温水浴中准确保温 10min

试剂三

250

250

250

250

250

混匀后于 15min 内测定 570nm 处测定管、对照管、空白管 1、标准管、空白管 2 的吸光度,分别记为 A 测定、A 对照、A 空白 1、A 标准和 A 空白 2,计算ΔA 测定=(A 空白 1-A 空白 2)-(A 测定-A 对照),ΔA 标准=A 标准-A 空白 2。标准曲线、空白管 1、空白管 2 1-2 次即可。

三、AMY 活性计算

1 标准曲线的绘制

ΔA 标准为 y 轴,以标准溶液浓度为 x 轴,绘制标准曲线,得到方程 y=kx+b。将 ΔA 测定带入方程得到 x(mg/mL)。

2、按照血清体积计算:

单位定义:每mL血清每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。

AMY活性 (U/mL)= x×V 样÷V 样÷T ×F =0.1×x ×F

V样:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;T:反应时间,10min;F:稀释倍数。

注意事项:

1. ΔA 测定大于 1.5 时,可以对样本进行适当稀释后测定。

2. 反应完成后需在 15min 内测定吸光度。



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