木质素含量检测试剂盒-木质素检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4123 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4122 规格:50T/48S 紫外分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 35 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 35 mL×1

4℃保存

试剂三

自备

4℃保存

试剂四

液体 34 mL×1

4℃保存

试剂五

液体 1.5mL×1

4℃保存

试剂六

液体 35 mL×1

4℃保存

溶液配制:

1. 试剂三:自备,石油醚,约需要 35mL。

2. 试剂四:该试剂具有强挥发性和一定的毒性,注意在通风橱操作并且每次用完用封口膜密封保存。

3. 试剂五:试剂有腐蚀性,注意防护。

产品说明:

木质素是构成植物细胞壁的成分之一,具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁,为次生壁主要成分。

木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板(非聚苯乙烯材质)、可调式移液枪、研钵、EP管、封口膜、冰乙酸、石油醚、30-50目筛和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

样本 80℃烘干至恒重,研磨,过 30-50 目筛,称取约 3mg 1.5mLEP 管中。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至280nm,分光光度计用冰乙酸调零。

2 操作表(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂):

乙酰化:

 

测定管

空白管

样本(mg

3

-

试剂一(µL

300

-

65℃水浴反应30min3000g,室温离心5min;去上清,留沉淀;

试剂二(µL

300

-

涡旋震荡5min3000g,常温离心5min;去上清,留沉淀;

试剂三(µL

300

-

涡旋震荡5min3000g,常温离心5min;去上清,留沉淀;

试剂四(µL

300

300

试剂五(µL

12

12

充分混匀(封口膜密封,防止水分散失)。于80℃水浴锅水浴40min,进行乙酰化。每隔10min震荡30s,然后自然冷却至室温。

试剂六(µL

300

300

充分混匀,于8000g,室温离心10min,取上清待测。


三、木质素含量计算

1、按微量石英比色皿计算:

木质素含量(mg/g)=ΔA÷ε÷d×V检测÷(V上清×W÷V乙酰化)=1.3105×ΔA÷W 木质素的百分含量(%)=木质素含量÷1000×100%=0.13105×ΔA÷W

V乙酰化:乙酰化反应体积,0.612mL;ε:木质素消光系数,23.35mL/mg/cm;d:比色皿光径,1cm;V上清: 上清液体积,0.012mL;V检测:检测体积,0.6mL;W:样本质量,g;1000:换算系数,1g=1000mg。

2、按96UV板进行计算:

将上述公式中的d-1cm修改为d-0.6cm(96孔板光径)进行计算即可。

注意事项:

1 试剂四有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。

2 加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。

3 冰乙酸具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱内操作。

4 取上清加冰乙酸步骤根据自己样本乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在0.1-0.8之间即可, 并在公式中参与计算。

5 由于冰乙酸具有挥发性,建议用比色皿进行测定实验。实验混匀后必须立即测定!


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