上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4123 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4122 | 规格:50T/48S |
紫外分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 35 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 35 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
自备 |
4℃保存 |
试剂四 |
液体 34 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂五 |
液体 1.5mL×1 支 |
4℃保存 |
试剂六 |
液体 35 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液配制:
1. 试剂三:自备,石油醚,约需要 35mL。
2. 试剂四:该试剂具有强挥发性和一定的毒性,注意在通风橱操作并且每次用完用封口膜密封保存。
3. 试剂五:试剂有腐蚀性,注意防护。
木质素是构成植物细胞壁的成分之一,具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁,为次生壁主要成分。
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板(非聚苯乙烯材质)、可调式移液枪、研钵、EP管、封口膜、冰乙酸、石油醚、30-50目筛和蒸馏水。
样本 80℃烘干至恒重,研磨,过 30-50 目筛,称取约 3mg 于 1.5mLEP 管中。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至280nm,分光光度计用冰乙酸调零。
2、 操作表(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂):
乙酰化:
|
测定管 |
空白管 |
样本(mg) |
3 |
- |
试剂一(µL) |
300 |
- |
65℃水浴反应30min。3000g,室温离心5min;去上清,留沉淀; |
||
试剂二(µL) |
300 |
- |
涡旋震荡5min。3000g,常温离心5min;去上清,留沉淀; |
||
试剂三(µL) |
300 |
- |
涡旋震荡5min。3000g,常温离心5min;去上清,留沉淀; |
||
试剂四(µL) |
300 |
300 |
试剂五(µL) |
12 |
12 |
充分混匀(封口膜密封,防止水分散失)。于80℃水浴锅水浴40min,进行乙酰化。每隔10min震荡30s,然后自然冷却至室温。 |
||
试剂六(µL) |
300 |
300 |
充分混匀,于8000g,室温离心10min,取上清待测。 |
三、木质素含量计算
1、按微量石英比色皿计算:
木质素含量(mg/g)=ΔA÷ε÷d×V检测÷(V上清×W÷V乙酰化)=1.3105×ΔA÷W 木质素的百分含量(%)=木质素含量÷1000×100%=0.13105×ΔA÷W
V乙酰化:乙酰化反应体积,0.612mL;ε:木质素消光系数,23.35mL/mg/cm;d:比色皿光径,1cm;V上清: 上清液体积,0.012mL;V检测:检测体积,0.6mL;W:样本质量,g;1000:换算系数,1g=1000mg。
将上述公式中的d-1cm修改为d-0.6cm(96孔板光径)进行计算即可。
1、 试剂四有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。
2、 加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。
3、 冰乙酸具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱内操作。
4、 取上清加冰乙酸步骤根据自己样本乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在0.1-0.8之间即可, 并在公式中参与计算。
5、 由于冰乙酸具有挥发性,建议用比色皿进行测定实验。实验混匀后必须立即测定!
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