上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 125 mL×1 瓶（自备） |
常温保存 |
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试剂一 |
液体 5 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 8 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 提取液：自备 60%乙醇，常温保存。
2、 标准品：5mg 没食子酸。临用前加入 1mL 蒸馏水，50℃加热溶解，配制成 5mg/mL 的标准溶液，2-8℃保存两周。
植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样本总酚含量。
最低检出限：0.0015 mg/mL
线性范围：0.0024-0.3125 mg/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎仪/研钵、30-50目筛、超声清洗仪、60% 乙醇、台式离心机、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
将样本烘干至恒重，粉碎，过 30-50 目筛之后，称取约 0.1g，加入 2.5mL 提取液，用超声提取法进行提取， 超声功率 300W，温度 60℃，提取 30min。12000rpm，25℃，离心 10min，取上清，用提取液定容至 2.5mL，待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至760nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准液的稀释：将5mg/mL没食子酸标准溶液用蒸馏水稀释至0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049 mg/mL，待测。
3. 标准液稀释可参考下表：
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
5 |
125 |
875 |
0.625 |
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2 |
0.625 |
250 |
750 |
0.15625 |
|
3 |
0.15625 |
200 |
200 |
0.078125 |
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4 |
0.078125 |
200 |
200 |
0.0391 |
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5 |
0.0391 |
200 |
200 |
0.0191 |
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6 |
0.0191 |
200 |
200 |
0.0098 |
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7 |
0.0098 |
200 |
200 |
0.0049 |
备注：实验中每个标准管需 10µL 标准溶液。
4. 操作表
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试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
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样本待测液（µL） |
10 |
10 |
- |
- |
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标准液（µL） |
- |
- |
10 |
- |
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蒸馏水（µL） |
- |
- |
- |
10 |
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试剂一（µL） |
- |
50 |
50 |
50 |
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涡旋混匀，室温准确静置2min |
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试剂二（µL） |
50 |
50 |
50 |
50 |
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蒸馏水（µL） |
140 |
90 |
90 |
90 |
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涡旋混匀，室温准确静置 10 min，于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定 760nm 处的吸光值，分别记为 A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准 =A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。 |
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1. 标准曲线绘制：根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度ΔA标准（x，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（x，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（y，mg/mL）。
2. 植物总酚含量计算：
（1） 按样本质量计算：总酚含量（mg/g 质量）=y×V提取÷W=2.5y÷W
（2） 按样本蛋白浓度计算：总酚含量（mg/mg prot）=y×V提取÷（V提取×Cpr）=y ÷Cpr V提取：加入提取液体积，2.5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。
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