植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号:UPLC-MS-4286                                 规格:100T/96S                       微量法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

4℃保存

粉剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂一

液体 20 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 3mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1、提取液:临用前将粉剂一倒入提取液中,溶液为悬浊液,使用前需摇匀。

产品说明:

LOX 广泛存在于植物组织中,特别是黄豆种子中。LOX 催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

LOX 催化亚油酸氧化,氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰;测定 234nm 吸光度增加速率,来计算 LOX 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

研钵/匀浆器、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 UV 板、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取约 0.1g 样本,加提取液 1mL,冰上充分研磨,16000g 4℃离心 20min,取上清液置冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 234nm,蒸馏水调零。

2. 试剂一在 25℃水浴中预热 30min 以上。

3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入20μL 蒸馏水、160μL 试剂一和20μL 试剂二,迅速混匀后于234nm比色,记录 15s 和 75s 的吸光值,分别记为 A1 和 A2。空白管只需做 1-2 次

4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入20μL 上清液、160μL 试剂一和20μL 试剂二,迅速混匀后于234nm比色,记录 15s 和 75s 的吸光值,分别记为 A3 和 A4。

三、LOX 活性计算

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下


1. 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在 1mL 体系下,25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为一个酶活单位。LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(Cpr×V 样)÷T×V 反总=10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2. 按样本质量计算

活性单位定义:在 1mL 体系下,25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为一个酶活单位。LOX (U/g  质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(V 样÷V 样总×W)÷T×V 反总=10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL(需另外测定);W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,

20μL=0.02mL;V 样总:上清液总体积,1mL;T:反应时间,1min;V 反总:反应总体系,0.2mL。

b. 使用 96  UV 板测定的计算公式如下

3. 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在 1mL 体系下,25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.0006 个单位为一个酶活单位。LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.0006÷(Cpr×V 样)÷T×V 反总=16667×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

4. 按样本质量计算

活性单位定义:在 1mL 体系下,25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化 0.0006 个单位为一个酶活单位。LOX (U/g  质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.0006÷(V 样÷V 样总×W)÷T×V 反总=16667×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL(需另外测定);W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,

20μL=0.02mL;V 样总:上清液总体积,1mL;T:反应时间,1min;V 反总:反应体系总体积,0.2mL。

注意事项:

1. 样本处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日完成酶活性测定。

2.正式实验前做 1~2 个预实验,保证∆A 的值在 0.02~1.2(微量石英比色皿)/0.01~0.72(96 孔板)范围内;若反应后为明显的悬浊液,则需稀释后再测。


上一篇:植物中酰脲含量检测试剂盒
下一篇:植物总酚(TP)含量检测试剂盒

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.047840s