1.原理

    硝酸还原酶是植物氮素同化的关键酶,也是一种诱导酶，与作物吸收和利用氮肥有关,可催化硝酸盐还原为亚硝酸盐:

    产生的NO2-在酸性条件下可以与对氨基苯磺酸(sulfanilic acid)或磺胺(对氨基苯磺酰胺,sulfanil-amide)反应生成重氮盐,再与α-萘胺反应生成红色偶氮化合物(对苯磺酸偶氮-α-萘胺)。

    生成的红色偶氮化合物在520 nm波长下有最大吸收值,可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可以每小时每克鲜重产生的NO2- μg 数表示酶活性(NO2- μg·g-1FW·h-1)。

    根据材料处理不同可分为活体法与离体法,根据反应介质的不同则可分为内源基质法和外源基质法。活体法步骤简单,适合快速、多组测定。离体法复杂,但重复性较好。内源基质法测定结果可反映硝酸还原酶在实际生长条件下的还原力，而外源基质法测定结果则可反映硝酸还原酶的潜在或最高还原力。下面介绍活体法的具体实验步骤。

2.试剂

(1).0.1 mol·L-1 pH7.5磷酸缓冲液：Na2HPO4·12H2O取30.0905g与Na2HPO4·2H2O取2.4965g，用蒸馏水定容至1000 mL。
(2).30%的三氯乙酸：30g三氯乙酸，蒸馏水溶后定容至100mL。
(3).0.2 mol·L-1 KNO3：20.22g KNO3用蒸馏水定容至1000 mL。
(4).磺胺试剂：1g 磺胺，加25mL 浓盐酸，用蒸馏水定容至100mL。
(5).α-萘胺试剂：0.2g α-萘胺，用含1 mL浓盐酸的蒸馏水定容至100mL。
(6).5 μg·mL-1 NO2-1标准液：0.10g NaNO2用蒸馏水定容至100mL，吸取7.5mL，再用蒸馏水定容至1000mL。

3.材料

欲测植物材料（如叶菜类蔬菜，实验材料在实验前一天可用硝态氮肥处理，以增强硝酸还原酶活性）。

3.方法步骤

（1）标准曲线制作：取7支15mL 刻度试管，按下表顺序添加试剂。

4.结果计算

从标准曲线中检出NO2-含量（μg·mL-1），以每小时每克鲜重产生的NO2-·μg数表示酶活性，计算方法：

式中，C：根据回归曲线计算的NO2- μg数；Vt：反应液总体积（mL）；Vs：测定时取样体积（mL）；FW：鲜重（g）；t：反应时间（h）。计算时，先分别计算3个重复的结果，再算平均值，为所求结果。